Глава 2. Методология химико-токсикологического анализа
____________________________________________________________________________
эритроцитах). Наиболее удовлетворительным следует считать анализ
сыворотки или плазмы крови.
Большая часть лекарственных веществ не связывается в
значительной степени с фибрином, поэтому результаты анализа
сыворотки и плазмы оказываются практически одинаковыми. Для
определения таких веществ удобнее работать с сывороткой крови.
Как известно, получение устойчивых в отношении свертывания
образцов плазмы крови требует добавления к пробе антикоагулянтов.
Обычно применяются гепарин, агенты, связывающие ионы кальция,
ЭДТА, соли лимонной кислоты (цитраты) или фтороводородной
кислоты (фториды). Добавление растворов этих веществ создает ряд
методических проблем: необходимо учитывать разбавление образца,
особенно при малых объемах крови, взятой, например, из пальца;
добавленные реагенты могут оказывать влияние на результаты
анализов. Фториды могут служить также в качестве консервантов
плазмы, в частности, фторид-ионы ингибируют сывороточную
холинэстеразу, которая при хранении образцов плазмы может
гидролизовать некоторые лекарственные вещества (например, кокаин,
ацетилсалициловую кислоту, новокаин).
Многие лекарственные вещества связываются (иногда на 90% и
более) с белками сыворотки крови, в основном с альбумином, реже – с
глобулинами. В то же время большинство методов определяет общую
концентрацию в виде суммы связанного и несвязанного с белками
лекарственного вещества в крови (плазме, сыворотке). Для веществ
слабо связанных (до 30%) с белками суммарная концентрация в
сыворотке близка к уровню свободного вещества.
При использовании большинства методов обработки образцов
сыворотки или плазмы создаются условия для разрушения комплекса
определяемого вещества с белками и в результате определяется общее
количество препарата (метаболита) в образце. Необходимо, чтобы
высвобождение вещества из комплекса было либо полным, либо
постоянным от опыта к опыту. Все операции по обработке проб
должны проводиться в строго одинаковых условиях для всех
стандартных (контрольных) и анализируемых проб. Одинаковым
должно быть время и интенсивность перемешивания фаз при
экстракции из сыворотки (плазмы), объем пробы и экстрагента, рН
водной фазы, чистота экстрагирующего растворителя и даже объем и
форма сосуда, в котором проводится процесс экстракции. Такие
требования строгой стандартности условий относятся и к другим
процессам обработки образцов – центрифугированию, процессам
дериватизации и т.д.
В ряде методов анализ проводится в так называемом
безбелковом фильтрате крови или других тканей, т.е. после осаждения
41
Do'stlaringiz bilan baham: |