Сборник содержит материалы научной мультиконференции «Биотех- нология медицине будущего»

Коррекция ошибок при ферментативной сборке протяженных
последовательностей ДНК
Шевелев Г.Ю.
1,2
, Переверзев И.М.
1,2
, Кечин А.А.
1,2
, Тупикин А.Е.
1
, Пышный Д.В.
1,2
1 Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН,
Новосибирск, Россия 
2 Новосибирский государственный университет, Новосибирск, Россия
Химико-ферментативный синтез последовательностей ДНК длиной около 1 тыс. п.н.
имеет большое значение для молекулярной биологии и генной инженерии, поскольку 
обеспечивает возможность к созданию кодирующих последовательностей нуклеино-
вых кислот, без использования матрицы ДНК, или РНК. Большинство современных 
способов синтеза протяженных последовательностей НК de novo основано на исполь-
зовании олигонуклеотидов, полученных методом твердофазного амидофосфитного 
синтеза. Как правило, полноразмерную последовательность ДНК разбивают на набор 
олигонуклеотидов таким образом, чтобы они имели взаимно перекрывающиеся 
комплементарные концы, позволяющие таким олигонуклеотидам гибридизоваться 
между собой в условиях реакции ферментативной элонгации, в результате которой 
синтезируется полноразмерный продукт.
В данной работе исследована структура и причины ошибок, обнаруживаемых
в составе генных конструкций. Показано, что большая часть ошибок в составе генных 
конструкций возникает на этапе синтеза олигонуклеотидов. В работе предложены 
подходы к минимизации ошибок в составе комплексов ДНК, формируемых на этапе 
сборки генных конструкций.
Предложенный подход позволяет снизить теоретическое количество клонов, 
отбираемых для скрининга целевых последовательностей до 10 раз.
Работа выполнена при поддержке проекта базового бюджетного финансирования МОН РФ
N 0245-2019-0002 и проекта РНФ 17-74-10157.

---

Всероссийская мультиконференция с международным участием «Биотехнология – медицине будущего»
29 июня - 2 июля 2019 г., г. Новосибирск, Россия
92