Сборник содержит материалы научной мультиконференции «Биотех- нология медицине будущего»

Изоформы длинной некодирующей РНК GAS5 в клетках человека
Зинченко Н.Д.
1,2
, Савельева А.В.
1
, Савиновская Ю.И.
1
, Филиппова Ю.А.
1
, Нуштаева А.А.
1
, 
Немудрая А.А.
1
, Кулигина Е.В.
1
, Степанов Г.А
1
, Семенов Д.В.
1
1
ФГБУН Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, 
Новосибирск, Россия 
2
ФГАОУ ВО Новосибирский национальный исследовательский государственный 
университет, Новосибирск, Россия
Длинные некодирующие РНК (днРНК) являются востребованными объектами сов- 
ременных молекулярно-биологических и генетических исследований. Ген GAS5 (growth 
arrest specific 5) человека кодирует 10 коротких мяоРНК и днРНК GAS5. Известно, что 
уровень днРНК GAS5 снижен в клетках злокачественных опухолей человека. Известно 
также, что экспрессия днРНК GAS5 в раковых клетках приводит к подавлению проли-
ферации, снижению жизнеспособности и активации проапоптотических процессов. 
Поэтому днРНК GAS5 и её изоформы являются перспективными объектами для создания 
новых подходов к диагностике и терапии онкологических заболеваний человека.
В данной работе проведён биоинформационный анализ данных массового парал-
лельного секвенирования РНК раковых и немалигнизированных клеток человека ли- 
ний SKOV3, HEK-293, MCF-7, A549, направленный на описание изоформ сплайсинга 
днРНК GAS5. Установлено, что в клетках человека основной изоформой днРНК GAS5 
является транскрипт, состоящий из 12 экзонов. Кроме того, выявлены изоформы сплай-
синга пре-днРНК GAS5 с пропуском части экзона 7, с полным пропуском экзона 10,
а также с удержанием 3, 7, 8, 9 и 10 интронов. Ранее нами были сконструированы
и наработаны плазмидные векторы (pCEP4_7, pCEP4_9, pCEP4_10), экспрессирующие 
основные изоформы днРНК GAS5 под промотором CMV. Установлено, что транс-
фекция этими плазмидными векторами сопровождается эктопической экспрессией 
днРНК GAS5 в клетках человека линий HEK-293 и A549. Трансфекция вектором 
pCEP4_9, кодирующим изоформу днРНК GAS5 с пропуском части 7 экзона, сопро-
вождается снижением жизнеспособности фибробластов HEK293. Повышение уровня 
днРНК GAS5 при трансфекции вектором pCEP4_7 приводит к снижению жизнеспособ-
ности клеток аденокарциномы лёгких человека А549. Было установлено, что инкубация 
клеток A549 в среде с циклогексимидом ведёт к снижению уровня эндогенной днРНК 
GAS5. Трансфекция клеток A549 вектором pCEP4_7, кодирующим полноразмерную 
изоформу днРНК GAS5, не приводит к изменению мРНК MYC, но приводит к увеличе- 
нию уровня мРНК транскрипционного фактора BRCA1. Так как BRCA1 является транс-
крипционным фактором полученные данные позволяют предположить, что экспрессия 
основной изоформы днРНК GAS5 повышает уровень фактора BRCA1 и модулирует 
экспрессию BRCA1-зависимых генов.
Работа выполнена при частичной поддержке проекта базового бюджетного финансиро-
вания Минобрнауки РФ (0245-2019-0001).

---

Всероссийская мультиконференция с международным участием «Биотехнология – медицине будущего»
29 июня - 2 июля 2019 г., г. Новосибирск, Россия
171