Сборник содержит материалы научной мультиконференции «Биотех- нология медицине будущего»

Создание перспективных NK-клеточных линий повышенной
цитотоксичности для аллогенной противораковой терапии
Юсубалиева Г.М.
1
, Кулемзин С.В.
2
, Бровкина О.И.
1
, Дашинимаев Э.Б.
3
, Смагина А.С.
2,4
,
Кальсин В.А.
1
, Коноплянников М.А.
1
, Санжаров А.Е.
1
, Винокуров А.Г.
1
, Баклаушев В.П.
1
,
Горчаков А.А.
2,4
, Таранин А.В.
2,4
1
Федеральный Научно-Клинический Центр ФМБА России, Москва, Россия 
2
Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, Новосибирск, Россия 
3
Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва, Россия 
4
Новосибирский Государственный Университет, Новосибирск, Россия
В последние годы с учетом более глубокого погружения исследователей в опухо-
левую иммунологию, фундаментальные исследования и клинические применения 
NK-клеток стали интересной темой для многих мировых лабораторий. Есть данные что 
аллогенные NK-клетки обладают более сильной способностью уничтожать опухоли, чем 
аутологичные NK-клетки [Mehta, R.S et all Front. Immunol. 2018]. Некоторой сложностью 
на пути использования аллогенных NK-клеток и клеточных линий является реакция 
хозяин-против-трансплантанта, однако её можно предотвратить используя MHC-де-
фицитные NK-клетки. Кроме того, представляют интерес генетически-модифициро-
ванные NK-клетки с повышенным уровнем цитотоксичности. В настоящей работе были 
скомбинированы оба подхода для получения MHC-негативной NK-клеточной линии 
YT повышенной цитотоксичности.
В клетки линии YT была интегрирована конструкция для оверэкспрессии белка-
позитивного регулятора цитотоксичности Vav1. Полученная линия YT-Vav1 характе-
ризуется многократным превышением количества белка Vav1 по сравнению с роди- 
тельской клеточной линией, а также другими NK-клеточными линиями, такими как 
NK-92 и KHYG-1. Цитотокисческая активность YT-Vav1 клеток достоверно возросла 
и проявляется в отношении модельных раковых линий PC3, DU145, G361, Caco2,
а также в отношении пациентных первичных раковых линий. В качестве последних были 
использованы полученные из операционного материала линии глиобластомы, аденомы 
простаты, карциномы и мезотелиомы. Все указанные мишени были лизированы 
YT-Vav1 эффекторами намного быстрее и активнее чем родительскими клетками YT.
Далее на основе полученной линии YT-Vav1, а также клеток YT дикого типа были 
получены MHC-негативные сублинии. Для этого была выбрана стратегия нокаутиро-
вания гена β2-микроглобулина. Из литературных данных известно, что в отсутствие 
продукта этого гена комплексы MHC I класса не экспонируются на поверхности клеток. 
При помощи CRISPR/Cas9 платформы было проведено геномное редактирование, при 
этом эффективность получения нокаутных клеток составила более 70%. Цитотокси-
ческая активность полученных MHC-нокаутных линий YT-Vav1-b2M-/- и YT-b2M-/- 
была не ниже, чем цитотоксическая активность родительских клеток. В перспективе 
указанные линии могут стать заделом для разработки доступной противораковой 
аллогенной NK-клеточной терапии.
Исследование было поддержано грантами РФФИ № 18-29-01022, 17-04-02044

---

Всероссийская мультиконференция с международным участием «Биотехнология – медицине будущего»
29 июня - 2 июля 2019 г., г. Новосибирск, Россия
94