С. А. Эгамбердиева молекуляр

радиоавтографнинг схематик 
тасвири. Катаклардан ҳар 
бирининг ичига ddATP, 
ddCTP, ddGTP ёки ddTTP 
дидезоксинуклеотидлардан 
бири жойлашган тўрт 
пробиркалардан бирининг 
ичидагилари киритилди. 
Нуклеотид кетма-кетлиги 
автографдан пастдан тепага 
қараб ўқилади. Расмда у ўнг 
томонда кўрсатилган. (
Глик ва 
Пастернак бўйича)
 
Секвенирлаш учун шунингдек М13 фаги асосидаги тизимдан 
фойдаланилади. Фаг ДНКсига секвенирланиши исталган 500гача 
нуклеотиддан иборат узунликка эга бўлган ДНК фрагменти 
киритилади(расм 12.9). Мазкур рекомбинант ДНКни бир занжирли 
шаклда олиш ва ундан вставкани секвенирлаш учун матрица 
сифатида фойдаланиш мумкин. Шунингдек клонланган ДНК тутган 
икки занжирли плазмидалардан ҳам фойдаланиш мумкин. 

---

82 
 
Расм.12.9. Бактериофаг 
М13дан клонлаш ва 
секвенирлашда 
фойдаланиш. 
А. ДНК фрагментини 
ДНК М13 икки занжирли 
репликатив шаклининг 
ичига ўрнатиш. 
Б. ДНК клонланган 
фрагментининг 
комплементар 
занжирларини айнан ўша 
бир праймер (Р1) ёрдамида 
секвенирлаш. Стрелкалар 
билан вставканинг 
(киритманинг) вектордаги 
турган жойи кўрсатилган.
(
Глик ва Пастернак бўйича) 
Чўзилган клонланган сегментларнинг нуклеотид кетма-
кетлигини аниқлаш учун дастлаб киритилган вставка билан қўшни 
бўлган соҳага комплементар бир нуклеотидли праймер танланади, ва 
дидезокси-усул 
ёрдамида 
дастлабки 
250-300 
нуклеотид 
секвенирланади. Кейин секвенирлаш натижаларига кўра иккинчи 
праймер синтезланади ва клонланган соҳанинг кейинги 250-300 
нуклеотидларининг кетма-кетлиги аниқланади ва ҳ.к. “Праймер-
воситали сайр” («праймер-опосредованная прогулка») деб номланган 
мазкур усул ДНК чўзилган фрагментларини уларнинг М13 фаги 
асосидаги тизим ҳолатидаги каби субклонланишисиз секвенирлаш 
имконини беради (расм 12.10).