Практическое занятие №1

Лабораторная работа.
«Исследование действия тирозиназы.
В меланацитах при окислении тирозина образуются меланин, представляющее собой полимеры невыясненного строения. От наличия этих пигментов зависят цвет волос, кожи, радушной оболочки глаз. Единственным ферментом, участвующим в образовании меланинов из тирозина, является тирозиназа. В химическом отношении этот фермент является металлпротеином, содержащим медь. Тирозина относится к оксидазам, ферментам, окисляющим субстраты кислородом воздуха. Тирозиназа широко распострены в растениях.
Ход работы. Для получения ферментного препарата тирозиназы сырой картофельный клубень очищают от кожуры, верхние слой клубня (2,0-4,0 г) кусочками нарезают в ступку, растирают с 10 мл дистиллированной воды и фильтруют фильтр. В две пробирки отмеривают по 1 мл полученного фильтрата; содержимое одной пробирки кипятят в течение 1-2 мин и затем охлаждают под струей водопроводно воды. В обе пробирки добавляют по 0,5-1,0 мл 0,1%-ного раствора тирозина, содержимое пробирок перемешивают и пробирки помешают в термостат при 37-40⁰С. Время от времении пробирки энергично встряхивают для лучшего соприкостновения с воздухом. Постепенно в одной пробирке под дейстием тирозиназа жидкость темнеет за счет образования окрашенных в черных цвет продукт окисления тирозина типа меланинов. В контрольной пробирке, где фермент иактивирован нагреванием, цвет жидкости не изменяется.
«Определение мочевины в сыворотке крови и моче».
Мочевина является одним из основных конечных продуктов белкового обмена. Выделение мочевины из организма свидетельствует об интенсивности белкового обмена – увеличивается при употреблении пищи, богатой белками, и снижается при безбелковой диете. В норме в сутки у здорового человека выделяется 20-35 г.мочевины (333-582 ммоль/сут). В сыворотке содержится 2,49-8,33 ммоль/л мочевины.
Азот мочевины составляет примерно половину остаточного азота сыворотки. Содержание мочевины в крови увеличивается при любых патологических состояниях. Однако наиболее важное диагностическое значение имеет увеличение количества мочевины при заболеваниях почек, когда наблюдается увеличение в 2-10 раз и более.
Метод основан на том, что мочевина образует с диацетилмонооксимом в присутствии тиосемикарбазида и солей железа в кислой среде окрашенное соединение, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию мочевины в растворе.