Практическое занятие №1

Лабораторная работа:

1. 
   Определение сахара в крови по цветной реакции с о-толуидином (метод Hulmanna’a)
   

Метод состоит в колориметрическом определении интенсивности окрашивания раствора образующегося при нагревании о-толуидина с глюкозой в присутствии уксусной кислоты. Метод является специфическим и дает возможность определять «истинную» глюкозу, так как другие редуцирующие вещества крови (глютатион, глюкуроновая кислота, аскорбиновая кислота и др.) с о-толуидиновым реактивом не дают окрашивания:
Ход работы. 1. В три пробирки (одна из них – центрифужная) отмеривают по 1,8 мл раствора ТХУК. В первую (центрифужную) пробирку прибавляют 0,2 мл крови (опытная проба), ва вторую – 0,2 мл стандартного раствора глюкозы (стандартная проба) и в третью – 0,2 мл воды (контрольная проба).
Содержимое пробирок перемешивают и опытную пробу (с кровью) центрифугируют в течение 10 мин при 2500-3000 об/мин. Центрифугат сливают в сухую пробирку. Осадок белка в опытной пробе можно отделить путем фильтрования в сухую пробирку через маленький бумажный фильтр.
2. Из каждой пробы отбирают по 0,5 мл раствора, переносят в другие пробирки, помеченные соответственно стеклографом, и добавляют во все пробирки по 4,5 мл о-толуидинового реактива. Пробирки закрывают кусочками фольги вместо пробок. Растворы перемешивают и помещают в кипящую водяную баню точно на 8 мин. После этого пробирки охлаждают под водопроводной водой и измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб на ФЭКе с красным светофильтром (длина волны 670 нм) в кювете с толщиной слоя 1 см против контрольной пробы.
Расчет производят по формуле
Е_оп
с_оп = с_ст
Е_ст
где с_оп – концентрация глюкозы в крови, ммоль/л; с_ст – концентрация стандартного раствора глюкозы, ммоль/л; Е_оп – оптическая плотность опытной пробы; Е_ст – оптическая плотность стандартной пробы.
В норме содержание глюкозы в крови 3,3 – 5,5 ммоль/л.