|
9.1. Получение накопительной культуры
Накопительной называют культуру, в которой доминируют
представители одной группы или даже одного вида микроорганиз-
мов. Для получения накопительной культуры необходимо создать
элективные
условия, которые обеспечат преимущественное развитие
выделяемой группы микроорганизмов.
Молочнокислые бактерии (МКБ) весьма требовательны к источ-
никам питания, и не все их представители растут даже в такой богатой
питательной среде, как молоко. Поскольку МКБ в отличие от других
бактерий устойчивы к спирту, элективной средой для них может также
служить неохмеленное сусло, содержащее 10–15 об.% этилового спирта.
С целью получения накопительной культуры мезофильных
МКБ источник выделения помещают в пробирку со стерильным
обезжиренным молоком и термостатируют в течение 24 ч при темпе-
ратуре 30±1 °С. После инкубации из свернувшегося молока готовят
фиксированный окрашенный препарат, просматривают его и при
наличии в микроскопической картине клеток, характерных для МКБ,
используют для выделения чистой культуры. Обычно для получения
накопительной культуры молочнокислых бактерий в пробирки со
стерильным обезжиренным молоком делают 2–3 пассажа.
9.2. Выделение чистой культуры
Для выделения чистой культуры МКБ на плотную среду мето-
дом Коха делают высев из накопительной культуры. Принцип метода
78
заключается в получении чистой культуры из изолированной коло-
нии, которую считают потомством одной клетки.
С целью получения изолированных колоний МКБ в стериль-
ном физиологическом растворе готовят десятикратные разведения
накопительной культуры, после чего стерильной пипеткой наносят
одну каплю соответствующего разведения этой культуры (10
–3
или
10
–4
) на поверхность плотной питательной среды в чашке Петри (гид-
ролизованное молоко с 1,5 % агара или сусло-агара). Материал осто-
рожно размазывают стерильным стеклянным шпателем по всей по-
верхности среды. Разведение готовят с таким расчетом, чтобы в од-
ной чашке вырастало не более 20–30 колоний. Затем этим же шпате-
лем во второй чашке протирают поверхность плотной среды. Засеян-
ные чашки выдерживают в термостате при температуре 30±1 °С в те-
чение 2–3 сут, после чего рассматривают и анализируют выросшие
колонии.
Внешний вид и строение колоний являются важными культу-
ральными признаками при определении вида микроорганизмов, так
как каждому виду присуща типичная форма колонии. Колонии изу-
чают невооруженным глазом в проходящем и отраженном свете
и под микроскопом при малом увеличении (8х). В проходящем свете
колонии рассматривают со стороны дна чашки. Отмечают величину
колоний (точечные – менее 1 мм, мелкие – 1–2 мм, средние – 2–4 мм,
крупные – от 4–5 мм и более), их форму (правильная, круглая, непра-
вильная, плоская, сферическая) и прозрачность. В отраженном свете,
рассматривая колонию со стороны крышки, определяют цвет, харак-
тер поверхности (гладкая, бугристая, блестящая, матовая), профиль
колонии (выпуклый, плоский, вдавленный).
Важно определить тип колонии. Различают два основных типа
колоний бактериальной культуры:
а) колонии гладкие –
S
-тип (от англ.
smooth
– гладкий), харак-
теризующиеся круглой и выпуклой формой, гладкой поверхностью,
влажной консистенцией;
б) колонии шероховатые –
R
-тип (от англ. rough – шерохова-
тый), характеризующиеся шероховатой поверхностью, неправиль-
ными краями, сухой консистенцией. Образуются из гладких
S
-форм
в результате мутации.
Помимо этих двух основных типов колоний существует так
называемый слизистый
М
-тип (от лат.
mucus
– слизистый), характе-
79
ризующийся тягучей слизистой консистенцией; образуется в процес-
се диссоциации бактериальных культур.
Для дальнейшей работы с чистой культурой по одной изоли-
рованной колонии МКБ пересевают в пробирки со стерилизованным
обезжиренным молоком. Посевы термостатируют при оптимальной
температуре в течение 18–24 ч (но не более 48 ч).
Примечание.
Иногда бывает достаточно одного посева на плот-
ную питательную среду для получения изолированных колоний. Одна-
ко чаще посев на плотную среду повторяют 2–3 раза, используя в каче-
стве посевного материала выросшие на чашках отдельные колонии.
Do'stlaringiz bilan baham: |
