O’zbekiston Milliy Universiteti Biologiya fakukteti 201-guruh talabasi

2.6. Lipidlarni perekisli oksidlanish induksiyasi va malon dialdegidining hosil

bo`lishini o`rganish

Fe

2+

  /  askorbat  ga  bog`liq  lipidlarning  perekisli  oksidlanishining

nefermentativ faollashuvi inkubasiya muhitiga (IM tarkibi: 125 mM KСI, 10mM Tris-

НСI,  рН  7,5)  10

-5

M  FeSO

4

  ва  2

.

10

-4

  M  аskorbat qo`shish  orqаli chaqirildi  va  1  ml

ajratish muhitida 8 mg oqsil borligi hisoblab topildi. Inkubasiya 37

o

С hаrorаtli suv

hammomida doimiy aralashtirib turilgan holatda amalga oshirildi.

LPO  ni  GPK  (gidroperekis  kumol)  ning  turli  konsentrasiya  (yuqori

konsentrasiya  4

.

10

-3

M)  larini  qo`shish  orqali  chaqirildi.  IM  da  oqsilning

konsentrasiyasi  taxminan  8  mg/  ml  ni  tashkil  etdi.  0,2  ml  70  %  li  TXUK  qo`shish

orqali reaksiya to`xtatildi. Shundan so`ng ushbu namunani 15 minut davomida 6000

g tezlikda sentrifugalandi. Keyin 2 ml qoldiqni ajratib oldik va  1 ml TBK qo`shdik.

Kontrol probirkaga 2 ml suv va 1 ml TBK qo`shdik. Aralashmani 15 minut davomida

qizdirdik.

Hosil  bo`lgan  malon  dialdegidi  miqdori  molyar  ekstinksii  koeffisienti  (e  =

1,56

.

10

5

  M

-1

  sm

-1

)  [Бoлдирев,  1990]  dan  foydalanib,  quyidagi  formulaga  asosan

(nmol MDA/ mg belka = D/1.56x30) hisoblandi.