Muhandislik qilingan oqsil-oqsil kompleksining strukturasini aniqlash va termodinamik stabilizatsiyasi

Protein-oqsil o'zaro ta'siri
22
Bu erda R - gaz doimiysi (1,9872 kal/K mol) va T - Kelvin va ÿHbinddagi harorat.
Ushbu konstantalar Gibbsning bog'lanish uchun erkin energiyasi bilan bog'liq:
va ÿS° bog'lanish mos ravishda bog'lanishning entalpiyasi va entropiyasidir.
ÿG° bog'lash = -RT lnKa= ÿH° bog'lash - TÿS° bog'lash
Machine Translated by Google

---

Protein muhandisligi
yaxshilangan katalitik faollik bilan almashtirish va shu bilan ular ifodani ishlab chiqdilar; oqsil
shablonga mos keladi va DNK polimeraza yordamida sintezi uchun primer sifatida ishlatiladi
Kovalent bo'lmagan o'zaro ta'sirlarning energiya hissasi (Metyu 1987; Shortl 1989; Pakula va
boshqalar va Uilkinson va uning hamkasblari tadqiqotida tirozil-transfer fermentidagi mutatsiyaga uchragan qoldiqlar
mutatsiya (Zoller va Smit 1982; Zoller va Smit 1983). Mutatsiya tomonidan kiritilgan
yovvoyi turga nisbatan mutantlarning hosildorligini oshirish uchun ko'plab yaxshilanishlar amalga oshirildi, qarang
qo'shimchalar. Saytga yo'naltirilgan mutagenezni amalga oshirish usullari birinchi navbatda foydalanishga asoslangan
foydalanib, phX174 bakteriofagining fenotipini o'zgartirish uchun nuqta mutatsiyasini kiritdi.
kerakli funksiyalarni olib tashlash yoki qo'shish mumkin. Shuningdek, u bizga protein sohalari haqida tushuncha berdi
Saytga yo'naltirilgan mutagenez o'ziga xos o'zgarishlarni kiritish uchun foydali usul ekanligini isbotladi
to'ldiruvchi ip. Getero-dupleks DNK kuchaytirilishi uchun E. coli ga aylanadi va.
muhandislik (Wilkinson va boshq. 1984). Protein muhandisligi oqsilga juda katta ta'sir ko'rsatdi
yangi maydonga qadam qo'yish, kodlash genini o'zgartirish orqali oqsilni maxsus o'zgartirish qobiliyati. The
butunlay yangi funktsiyalarga ega bo'lgan oqsillarni qayta loyihalash. Maydon odatda a dan boshlab hamma narsani o'z ichiga olishi mumkin
1995 yil; Venekei va boshqalar. 1996).
gibridlangan bir yoki bir nechta mos kelmaydigan nukleotidlarni o'z ichiga olgan sintetik oligonükleotidlar
Ularning hissasini baholash uchun RNK sintetaza. Ular aminokislotalarni muvaffaqiyatli kutishdi
Sauer 1990; van den Burg va Eijsink 2002), shuningdek, o'ziga xoslik va katalizda, masalan,
bir zanjirli DNKda oligonükleotidlar (Hutchison va boshq. 1978). Bu tez orada kuzatildi
katlama yo'llari (Fersht va Daggett 2002) va miqdorni aniqlash orqali barqarorlik.
bir zanjirli DNK, bu erda M13 faglari yoki fagemid vektorlari shablon sifatida ishlatilgan.
DNK. U bitta nuqta mutatsiyasini yoki nuqta mutatsiyalarini, o'chirishni yoki kombinatsiyasini qamrab olishi mumkin
Ushbu yondashuvni birinchi bo'lib 1978 yilda Maykl Smit va uning hamkasblari muvaffaqiyatli tasvirlab berganlar.
butun domenlarni o'chirish yoki qo'shish uchun bitta aminokislota o'rnini bosish, agar kerak bo'lmasa yoki
23
1970-yillarning oxirida texnik yutuqlar molekulyar biologiya uchun vaqtni tayyorladi
so'nggi o'n yilliklarda ilm-fan. Bu oqsillarning xususiyatlarini yaxshilash va yaxshilash imkonini berdi
Mutantlar turli skrining usullari bilan olinadi va keyinchalik ketma-ketlashtiriladi. O'shandan beri
tripsinning o'ziga xosligini ximotripsinga aylantirishga urinish (Graf va boshq. 1987; Perona va boshqalar.
5 Protein muhandisligi
5.1 Protein muhandislik usullari
Machine Translated by Google

---