Определение лекарственных веществ в биологическом материале методом хромато-масс-спектрометрии

Подготовка биоматериала к хромато-масс-спектрометрическому исследованию.

• Цель подготовки биологического материала к «скрининговому» хромато-масс-спектрометрическому исследованию - выделение исследуемых соединений из крови, мочи, внутренних органов.
• Состоит пробоподготовка из следующих последовательно проводимых операций:
• Извлечение подкисленной водой: к 10 мл крови, мочи добавляли 20 мл дистиллированной воды (в случае исследования внутренних органов, 100 г. измельченного материала заливали 200 мл дистиллированной воды), подкисляли щавелевой кислотой до рН=2, настаивали при помешивании 3 часа, рН контролировали;
• Экстракция: кислую водную вытяжку из крови, мочи, внутренних органов трижды экстрагировали эфиром (30,20,20 мл). Эфирное извлечение из кислого раствора центрифугировали 5 мин., отбирали органическую фазу, фильтровали через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия. Водную часть исследуемого раствора крови, мочи, вытяжки из внутренних органов подщелачивали 25% раствором аммиака до рН=9-10. Щелочной раствор трижды экстрагировали хлороформом (20,20,20 мл). Хлороформное извлечение центрифугировали, отбирали органическую фазу, которую фильтровали через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия.

Концентрирование: объем эфирных и хлороформных извлечений из крови, мочи, внутренних органов концентрировали при комнатной температуре до 25 мл.

• Концентрирование: объем эфирных и хлороформных извлечений из крови, мочи, внутренних органов концентрировали при комнатной температуре до 25 мл.
• Принцип метода: эфирные вытяжки из кислого раствора захватывают соединения кислой природы (например, барбитураты), а также вещества, обладающие слабо основными свойствами, а хлороформные вытяжки из щелочного раствора – алкалоиды и вещества основного характера.
• Хромато-масс-спектрометрическое исследование.
• По 10 мл хлороформных и эфирных экстрактов, полученных в результате пробоподготовки извлечений упаривали под током азота до «сухого остатка», который растворяли в 0,5 мл хлороформа, переносили в виалы автосамплера. 1 мкл каждой исследуемой пробы вводили в испаритель газового хроматографа с масс-селективным детектором.