Muhandislik qilingan oqsil-oqsil kompleksining strukturasini aniqlash va termodinamik stabilizatsiyasi

Z:ZSPA-1 kompleksining termodinamik stabilizatsiyasi
Biz ZSPA-1 ga ma'lum pozitsiyalarda sisteinlarni kiritish uchun saytga yo'naltirilgan mutagenezni qo'lladik.
bog'lovchi sirtini o'zgartirish. ZSPA-1 ning oltita disulfid bilan bog'langan varianti ishlab chiqilgan. Har birida
barqarorlashuv ham kuzatilgan (Kuroki va boshq. 1992; Betz 1993; Vaz va boshq. 2006). Bunga o'xshash
oldingi kuzatuvlarga mos keladi, bu erkin ZSPA-1 ning hidrofobik yadrosi emasligini ko'rsatadi
suv kirishi mumkin bo'lmagan yaxshi o'ralgan hidrofobik yadro hosil bo'lishidan (Merfi va
ZSPA-1ni o'zining bog'langan va aniq belgilangan konformatsiyasida barqarorlashtirish uchun almashtirish
mutant, ikki aminokislotalar disulfid ko'prigini hosil qilish uchun sisteinlarga almashtirildi.
Freire 1992; Spolar va boshqalar. 1992 yil; Maxatadze va Privalov 1993). Shuning uchun bu natijalar
Z: ZSPA-1 kompleksining NMR tuzilishi sistein uchun mos keladigan aminokislotalarni tanlash uchun ishlatilgan.
buklangan holatning barqarorligi (Schellman 1955; Flory 1956; Anfinsen va Scheraga 1975; Pace va boshqalar.
1988 yil; Mansfeld va boshqalar. 1997 yil; Abkevich va Shaxnovich 2000). Ammo entalpik ta'sir
(Reiter va boshq. 1996; Starovasnik va boshq. 1997). Biroq, bizning ma'lumotlarimizga ko'ra, termodinamik asos
SDS-PAGE tomonidan aniqlanadigan miqdorlar. Buning sababi mutant 6 oqsil bilan bog'lanmasligi bo'lishi mumkin
ko'prik ochilgan holatning konformatsion entropiyasini pasaytiradi va shu bilan uni oshiradi
Protein-A-sefaroza yordamida yaqinlik bilan tozalanadi. Mutant 6: A12C/S41C ni tozalash mumkin emas
A.
48
bunday mumkin bo'lgan yaxshilanish uchun termodinamik asos.
Mansfeld va boshqalar. 1997 yil; Starovasnik va boshqalar. 1997 yil; Mårtensson va boshqalar. 2002). Bu disulfid deb ishoniladi
ZSPA-1 ning beshta juft sisteinli mutantlari E.coli va hujayra ichida samarali ishlab chiqarilgan.
yaqinlik ZSPA-1 ning disulfid muhandisligi va shu bilan birga kamayishi mumkin edi
globulyar oqsillar (Wells and Powers 1986; Matsumura va boshq. 1989; Matsumura va boshq. 1989;
o'rgangan.
Keyingi nashrda (IV) konformatsion entropiyaning bog'lanishga ta'siri o'rganildi
Bir qator tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, disulfid aloqalari mahalliy tuzilmalarni barqarorlashtirish uchun ishlatilishi mumkin
o'rganish, disulfid ko'priklari konformatsion barqarorlashtirish orqali bog'lanishni yaxshilash uchun ishlatilgan
konformatsion stabilizatsiya orqali bog'lanish yaqinligini yaxshilash uchun ilgari bo'lmagan
to'liq shakllangan (II, III).
9.2 Disulfid muhandisligi (IV)
Machine Translated by Google

---