Muhandislik qilingan oqsil-oqsil kompleksining strukturasini aniqlash va termodinamik stabilizatsiyasi

ZSPA-1 (II, III) affikorining biofizik tavsifi
konsentratsiyasi va mutatsiyaga uchragan ikkita qoldiq Phe-32 va Trp-35 katta ehtimol bilan ishtirok etadi
domen. CD tajribalari o'z-o'zini assotsiatsiya qilishni qo'llab-quvvatlaydi, chunki spektrlar katta o'zgarishlarga uchraydi
jarayonda.
millimolyar kontsentratsiyaga yaqinlashadi. O'rtacha qoldiq elliptikligi ortishi bilan kamayadi
40
konsentratsiya o'z-o'zidan assotsiatsiyalanganda a-spiral tarkibning o'rtacha qisqarishini ko'rsatadi (8.2-rasm).
W35K mutatsiyasi nosimmetrik cho'qqini ko'rsatadigan, ammo kattaroq bo'lib ko'chib yuradigan oqsilga olib keladi.
Kam konsentratsiyali ZSPA-1 ning CD spektrlari xarakterli a-spiral ko'rinishni ko'rsatadi
215 nm da jarayonni kuzatishda ko'rish mumkin bo'lgan protein (8.1b-rasm).
Shunday qilib, natijalar ZSPA-1 mM da o'z-o'zini assotsiatsiya qilishiga mos keladi.
208 va 222 nm da minimal bilan, hatto o'rtacha qoldiq elliptikligi Z ga qaraganda past bo'lsa ham
Shakl 8.1 Jeldan elutsiya profillari
doiralar). Z-domeniga havola sifatida
filtrlash tajribalari. A) Z
doiralar), F32Q (olmoslar), W35K
6,6 kDa va ribonukleaza A 13,7
(uchburchaklar) va F32Q/W35K (yulduzlar)
domen (qattiq kvadratlar), ZSPA-1
1 mM konsentratsiyada yuklangan.
kDa (ochiq kvadratlar) ishlatilgan.
2 mM (qattiq doiralar) da yuklangan va
B) ZSPA -1 mutantlari V11N (ochiq
ZSPA-1 0,1 mM da yuklangan (ochiq
Machine Translated by Google

---

ZSPA-1 (II, III) affikorining biofizik tavsifi
-10 000
-30 000
250
-5000
10000
-25 000
240
-20 000
230
0
220
5000
-15000
210
200
-35 000
ZSPA-1
1
spektr (8.3a-rasm) oqsil bilan mos keladigan bir nechta rezonanslarning keskin kengayishini ko'rsatadi.
bir nechta konformatsiyalar orasidagi o'zaro konversiyalar o'rtacha qiymatga olib keladi. Past konsentratsiya (50
Z domeniga nisbatan (~ 75 °C ga nisbatan 40 °C). Kamaytirilgan kooperativ erish
ochish va ANS ulanishi orqali. The
ZSPA-1 ning biofizik xususiyatlari yana NMR, termal va kimyoviy bilan tavsiflangan
mM) yoki turli pH spektrga unchalik ta'sir qilmaydi. ning sezilarli yaxshilanishi
spektri namunaga etiketlanmagan Z domeni oqsili qo'shilganda kuzatiladi. Buning natijasida
o'tish hidrofobik yadroning qadoqlanishining yo'qolishini qo'llab-quvvatlaydi. Kamaytirilgan barqarorlik va past
H 15N heteronuklear yagona kvant korrelyatsiyasi NMR
yordamida kimyoviy denatürasyon uchun xona haroratida kooperativ denaturatsiya ham kuzatildi
keskin rezonanslar va yaxshilangan dispersiya (8.3b, c-rasm).
41
Affibody molekulasining termal erish profili sezilarli darajada past termal barqarorlikni ko'rsatadi
500 mkM
200 mkM
25 mkM
400 mkM
Z domeni (25 µM)
ZSPA-1 20 ºC da 20 mM KPi da
50 mkM