Muhandislik qilingan oqsil-oqsil kompleksining strukturasini aniqlash va termodinamik stabilizatsiyasi

Affibody-maqsadli juftlikning tarkibiy tahlili (I, II)
7.1 Z: ZSPA-1 tizimi
IgG bog'lovchi interfeys. Ammo to'liq ma'lumot berish uchun kompleksning atom tuzilishi kerak edi
affibody o'sha paytda ma'lum edi. Tanlov jarayonida IgG bilan raqobatbardosh elyusiya
ushbu loyiha davomida yuqori baholandi.
Z dagi tan olingan bog'lovchi sirtning hech bo'lmaganda bir qismi uning bilan ustma-ust tushgandek tuyuldi
Z: ZSPA-1 kompleksini o'rganish tanlovi bir necha sabablarga ko'ra amalga oshirildi. Birinchidan, a ning tuzilishi yo'q
ZSPA-1 affikoridan tashkil topgan oqsil-oqsil kompleksining NMR tuzilishi va uning
Shuni ham ta'kidlash kerakki, bu kichik va oson ishlov beriladigan oqsillarning xarakteri yuqori bo'lgan
pT7 bilan belgilanadi (Eklund va boshq. 2002), natijada ularning N-terminalida qo'shimcha metionin paydo bo'ladi. The
oqsil uning ajdodi sifatida xizmat qiladi.
oqsil-oqsil o'zaro ta'siri, xususan, sun'iy bog'lovchi oqsillar uchun. U qila oladi
Bu bitta protein etiketli, ikkinchisi yorliqsiz bo'lgan NMR namunalari yordamida osonlashtirildi
va aksincha. Ikkala oqsil ham yaqinlik xromatografiyasi (IgG-sefaroza va SPA) bilan tozalangan.
mos ravishda Z va ZSPA-1 uchun sefaroza ) keyin gel filtrlash (I). Birinchi navbatda pH tanlandi
Z-domeniga kelsak. Bu ZSPA-1 o'zaro ta'sir o'tkazishga qodir bo'lgan bog'lovchi saytga ega bo'lganligini anglatadi
butun kompleks uchun) ushbu kompleksni NMR tomonidan tizimli tadqiqotlar uchun yaxshi namunaviy tizim qiladi
kompleksdagi ikkita oqsilning signallari. Bir vaqtning o'zida bitta protein komponenti tahlil qilindi,
33
va boshqalar. 2002). Affikorlar SPA ning barcha besh domeniga mkM yaqinlik bilan bog'lanishi aniqlandi.
maqsadli oqsil (II) bilan kompleksda affibody bog'lovchi. Ikkinchidan, Z: ZSPA-1 ning kichik o'lchamlari (~15 kDa
va boshqalar. 1996). NMR tadqiqotlari uchun izotop belgilarini farqlash imkoniyatiga ega bo'lish uchun zarur edi
Xuddi shu jurnalda boshqa guruh tomonidan hal qilingan (Högbom va boshq. 2003)
Stafilokokk oqsili A (SPA) va inson IgG (Eklund) yordamida raqobatbardosh elutsiya orqali tiklanadi.
15N-(NH4)2SO4, 13C-glyukoza yoki ikkalasi bilan toÿldirilgan minimal muhitda ifodalangan (Jansson)
antiidyotipik affitel bog'lovchilarini tanlash maqsadi, ZSPA-1 bog'lovchi sifatida tanlangan.
rasm. Ushbu kompleksning NMR tuzilishini, shuningdek, kristall tuzilishini aniqlash
Proteinlar pET-28a(+)-vektori varianti yordamida E.coli-da hujayra ichida ifodalangan.
yorliqsiz oqsillar Luria Broth muhitida, izotop bilan boyitilgan oqsillar esa ishlab chiqarilgan
Z domenining bog'lovchi sherigi yadro magnit-rezonansi (NMR) bilan aniqlandi. Bilan
7 Affibody-maqsadli juftlikning tarkibiy tahlili (I, II)
Machine Translated by Google

---