Микробиология ва иммунология амалий машғулотлар режаси

Грам усулида бўяш учун фиксацияланган суртма тайёрланади.
1.Генциан бинафша бўёғи билан бўяш (2 минут)
2.Люгол йоди эритмаси (1 минут)
3.Этил спирти 96º С (30 секунд)
4.Сув билан ювиш.
5.Фуксиннинг сувли эритмаси (3 минут)
6.Сув билан ювиш.
6.Тайёрланган суртма қуритилиб имменсион ёғи томозилиб микроскоп остида кўрилади. Грам (+) бактериялар бинафша, Грам (-) бактериялар қизил рангга бўялади.


Бурри-Гинс усули.
Бу усули билан бўяб, капсулали бактерияларнинг капсуласини аниқлаш мумкин. Бунда қора фонда капсулар рангсиз ҳолда бўлиб, бактериялар фуксин билан бўялади. Бу усулда бўяш учун туш ва бактерия культураси яхшилаб аралаштирилади. Аралашма худди қон суртмасига ўхшаб буюм ойначасида ёйилади. Тайёрланган суртма хона хароратида қуритилади. Қуриган суртма устига фуксин бўёғи томизилади ва 2-3 мин ушлаб турилади. Сув билан ювилиб суртма қуритилади ва микроскопда кўрилади.


Циль-Нильсен усули.
Кислотага чидамли бактериялар Циль – Нельсен усули билан бўялади. Кислотага чидамли бактериялар хужайра девори ва цитоплазмасида микол кислотаси, карболкислота, ёғлар ва ёғ кислаталари кўп бўлади, бу кислоталар хужайранинг тинкториял хусусияини оширади. Буёкнинг юкори концентрацияси ва қиздириш туфайли хужайра деворинингбуёк билан таъсирлашув реакцияси кучаяди ва бактерия кизил ранга буялади. Сульфат кислота билан ишлов берилганда кислотага чидамсиз бактериялар таъсирида рангсизланади ва метилкўки билан кўкранга бўялади.
Бу усулда бўяш босқичлари қуйидагича олиб борилади:
1.Фиксация килинган микроб сурмасига тоза квадратли фильтр қоғози қуйилади.
2.Фильтр қоғози устига бир неча томчи фуксиннинг спиртли эритмаси томизилади.
3.Спиртовка устида пар ҳосил бўлгунча ушлаб турилади.
4.Фильтр қоғозини суртмадан олиб ташланади.
5.Суртмани H2SO4ни 5% эритмасида 30 секунд ушлаб турилади.
6.Сув билан яхшилаб ювиб ташлаш.
7.Метилен кўки билан бўяш.
8.Сув билан ювиб ташлаш.
Тайёрланган сутма қуритилиб микроскоп остида кўрилади. Кислотага чидамли бактериялар қизил, чидамсиз бактериялар кўк рангга киради.


Ожешко усули.
Ожешко усулида фиксация қилинган суртма 5 мин. 5% НСl ушлаб турилади ва қолган этаплари Циль-Нильсен усулида бўялади яъни
1.Фиксация килинган микроб сурмасига тоза квадратли фильтр қоғози қуйилади.
2.Фильтр қоғози устига бир неча томчи фуксиннинг спиртли эритмаси томизилади.
3.Спиртовка устида пар ҳосил бўлгунча ушлаб турилади.
4.Фильтр қоғозини суртмадан олиб ташланади.
5.Суртмани H2SO4ни 5% эритмасида 30 секунд ушлаб турилади.
6.Сув билан яхшилаб ювиб ташлаш.
7.Метилен кўки билан бўяш.
8.Сув билан ювиб ташлаш.
Тайёрланган сутма қуритилиб микроскоп остида кўрилади. Кислотага чидамли бактериялар қизил, чидамсиз бактериялар кўк рангга киради.


Нейссер усули.
Нейссер усули билан валютин доначалари бўялади. Валютин доначаси цитоплазмадан фарққилиб, ишқорий реакцияда бўлади. Шунинг учун синька ацетатни қабул қилиб, тўк кўк ранга бўялади. Хужайра цитоплазмасида кислотали мухит бўлганлиги учун, цитоплазма ишқорий бўёк – везувинни қабул килиб, сариқ рангга бўялади.


1.Фиксацияланган суртмага Нейссер синька ацетати томизилади – 3 минут
2.Люголь эритмаси – 10-30 секунит
3.Сув билан ювиш
4.Визувин ёки хризоидин эритмаси 0,5-1 минут
5.Сув билан ювиш.