Microsoft Word Conf-селекция rtf

Материалы и методы. 
Объектом исследования были 14 изолятов рода Fusarium, собранные из 
различных регионов Узбекистана (Таб. 1). В качестве контроля были использованы известные расы 
Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum , предоставленные университетом Дэвиса.
ПЦР-анализ проводили с использованием специфичных праймеров для однокопийных генов: 
трансляционный фактор элонгации (ЕF-1α), β-тубулин (BT) и рибосомальная ДНК (rDNA) [1,2].
Амплификация шла в объеме 25 мкл реакционной смеси, которая содержала 1,5 мкл ДНК, 2,5 мкл
10 х ПЦР-буфера, 0,2 мкл dNTP (дезоксинуклеозидтрифосфаты), 0,5 мкл BSA, 0,37 мкл (5 µM) каждого 
праймера, одну ед. ДНК- полимеразы и 19,06 стерильной воды. ПЦР-реакция проводилась в 
амплификаторе GeneAmp PCR System 9700. (Арplied Biosystems, USA) при следующих параметрах: 
начальная денатурация ДНК при 95
0
С, 50 сек, 56
0
С, 30 сек, и 72
0
С, 50 мин, конечной фазы синтеза ДНК 
при 72
0
С в течении 7 минут, 40 циклов для EF-1α, начальная денатурация ДНК при 94
0
С, 30 сек, 52
0
С, 30 
сек, и 72
0
С, 1 мин 30 сек, конечной фазы синтеза ДНК при 72
0
С в течении минуты, 35 циклов для rDNA, 
начальная денатурация ДНК при 94
0
С, 30 сек, 52
0
С, 30 сек, и 72
0
С, 1 мин 30 сек, конечной фазы синтеза 
ДНК при 72
0
С в течении 5 минут, 35 циклов для ВТ. Полученные ПЦР фрагменты были 
просеквинированы. Определение нуклеотидной последовательности амплификатов проводили при 
помощи автоматического секвенатора 3130xl Genetic Analyzer (Applied Biosystems). Верификация данных 
проводилась сопоставлением полученных нуклеотидных последовательностей с генетическим банком 
NCBI при помощи blast-анализа. Последовательности по трем генам были искусственно объединены и 
выровнены с помощью программ Sequencher 4.9 (Gene Code Corporation, USA), BioEdit Sequencer 
Alignment Editor 7.0.9.0. Филогенетический анализ был проведен при помощи UPGMA-анализа в 
программе PAUP 4.06b10 (Sinauer Associates). 

---

294