Method · March 2008 doi: 10. 13140/RG

4 . Реактивлар ва эритмалар:
1) Хлороформ, “ чда”;
2) Этил спирти, 96%;
3) Бензол, “чда” ;
4) Ацетон, “ чда” ;
5) Гексамидин ва фенобарбиталнинг ишчи стандарт намунаси;
6) Бромфенол куки реактиви;
7) Симоб сульфатнинг 5 % эритмаси;
8) Дифенилкарбазоннинг 0,02 % хлороформли эритмаси;
9) Х роматографик пластинкалар “Silufol UV 254” ;
10) Натрий хлорид, “чда”;
11) Сувсиз натрий сульфат, “чда” ;
12) ЮССХ учун ацетонитрил ;
13) Оксалат кислотаси.
5. 
Гексамидиннн 
ва 
унинг 
метаболити 
фенобарбитални 
бнологик
ашёлардан аж ратиб олиш ва текш ирувга тайёрлаш
Биологик аш ёлардан гексамидин ва унинг метаболити фенобарбитални ажратиб 
олишда ацетон - сувли усулни таклиф этилади. Бунинг учун 50 г майдаланган 
биологик ашё 250 мл х,ажмли колбага солиб, биологик ашё 50 мл ацетон билан 
аралаштирилади ва 5 мл 10% оксалат кислотасининг эритмасидан кушиб, вакти- 
вакти билан аралаш тириб турган холда 1 соатга колдирилади. Колбадаги нордон 
ацетон-сувли ажратмани докадан сузиб олиниб, биологик ашё яна 50 мл ацетон- 
сув(5:3) аралашмаси билан аралаштирилади ва 5 мл 10% оксалат кислотаси 
эритмасидан кушиб, вакти-вакти билан аралаштириб турган холда 1 соатга 
колдирилади. Колбадаги кордон ацетон-сувли ажратма сузиб олинади ва бу жараён 
яна бир маротаба кайтарилади. Ажратмалар бирлаштирилиб, 5 дакика давомида 
3000 айл/дак. центрифугаланди ва ажратгич воронкага фильтр когоз ёрдамида 
фильтрлаб утказилиб, ацетон катлами ажралгунча натрий хлорид тузи билан 
туйинтирилади. С унгра ацетон катлами ажратиб олиниб, сувли катлам 25 мл ацетон 
билан 
ишланиб, 
ацетон 
катлами 
куйиб 
олинади. 
Ацетонли 
катламлар 
бирлаштирилиб, сув хдммомида (40-50 °С) ацетон хиди колмагунча парлатилиб, 
сувли кйсми ажратгич воронкага утказилиб, 3 кайта 10 мл дан хлороформ билан 
чайкатиб хлороформли эритма ажратиб олинади. Олинган хлороформли эритмалар 
бирлаштирилиб, 5,0 г сувсиз натрий сульфат саклаган фильтр когоз оркали 
фильтрлаб олинади ва курук колдик колгунча парлатилади. Куру к колдик 1 мл этил 
спиртида эритилиб, ёт моддалардан тозаланиб, сунгра гексамидин ва унинг 
метаболити ф енобарбитал га текширув амалга оширилади.

---

колонкасига юборилди. Текширув вактида хроматограммада гексамидинга хос 
булган ушланиш вактига эга булган 12,28 дакикада чуккилар пайдо булди. Су игра 
биологик ашё таркибидан ажратиб олинган ва ,ёт моддалардан тозаланган 
гексамидин эритмасини ГХ-МС усулида текширув амалга ош ирилди ва биологик 
ашёдан ажратиб олинган намуна ва ишчи стандарт модданинг уш ланиш вакти билан 
бир хил натижа бериши кузатилди. Сунгра \осил булган чуккиларни масс- 
спектрофотометрик усулда куриб чикилди. Хар бир хроматограммадаги чукки учун 
хам ионлар (218; 190; 161; 146; 117; 103; 91; 77; 51 m/z массага эга булган булак 
ионлар) тугри келиши аникланди. Тажриба натижасида олинган гексамидиннинг 
хроматограммаси 
ва 
масс 
спектрлари 
компьютер 
маълумотлар 
банкида: и 
курсаткичлар 
билан 
солиштирилди 
ва 
уларнинг 
тузилиш и 
гексамидин 
структурасига мос келиши аникланди.
Сунгра 
юкоридаги 
текширув 
шароитида 
гексамидиннинг 
метаболити 
фенобарбитални ГХ-МС усулида аниклаш амалга оширилди. Бунинг учун аник 
микдорда (0,01 г а.т.) фенобарбитал саклаган стандарт намуна эритмаси асосида 
тайёрланган 50 ва 100 мкг/мл концентрацияли ишчи эритмалар олиниб хроматограф 
колонкасига юборилди. Текширув вактида хроматограммада фенобарбиталга хос 
булган ушланиш вактига эга булган 9,6 дакикада х,осил булган чуккига асосан 
аниклаб олишга эришилди. Сунгра биологик ашё таркидан ажратиб олинган ва ёт 
моддалардан тозаланган гексамидиннинг метаболити фенобарбитал эритмасини ГХ- 
МС усулида текшириш амалга оширилганда ишчи стандарт модданинг ушланиш 
вакти билан бир хил натижа бериши кузатилди. Хосил булган чуккиларни масс- 
спектрофотометрик усулда куриб чикилди. Хроматограммадаги х,ар бир чукки учун 
х,ам бошка ионлар (232; 204; 161; 146; 117; 103; 91; 77; 51 m/z массага эга булган 
булак ионлар) тугри келиши аникланди. Олинган натижалар асосида гексамидин ва 
унинг метаболити фенобарбитални биологик ашёлар таркибидан чинлигини 
аниклаш курсаткичларидан бири сифатида кулланилиши мумкин.