Mavzu raqami yurak glikozidlari

Junli tulki (Folium Digitalis lanatae) barglarida A, B, C lanatozidlarini miqdoriy aniqlash usuli .

Texnika yurak glikozidlarini xromatografik ajratishga, so'ngra spektrofotometrik aniqlashga asoslangan.

5,0 g maydalangan xom ashyo (aniq o'lchab, teshikning diametri 1 mm bo'lgan elak) qora tsilindrli shisha idishga solingan tiqin bilan solinadi, 50 ml 80% metil spirt quyiladi va 24 soat davomida quyiladi. Buchner voronkasida suziladi va 4 g xom ashyoga mos keladigan 40 ml ekstraktsiyani tadqiq qilish uchun olinadi. Ekstrakt spirtli ichimliklar olinmaguncha, 50-60 ° S haroratda vakuum ostida suv hammomida bug'lanadi. Qolgan hajmga (3-4 ml) 5-7 ml suv solib, ajratuvchi voronkaga soling. Suvli eritma uglerod tetraklorid bilan 5 marta 10 ml dan tozalanadi. Tozalangan suvli eritmadan glikozidlar xloroform va izopropanol (3: 1) aralashmasi bilan 4 marta 10 ml dan ajratib olinadi. Glikozidlarni qazib olishning to'liqligi Huquqiy reaktsiya tomonidan boshqariladi. Xloroform-izopropanol ekstrakti natriy sulfat bilan suvsizlanadi va qog'oz filtri orqali filtrlanadi. Filtrdagi natriy sulfat 5 ml suvsizlangan aralashma bilan yuviladi, u filtratga qo'shiladi va 50 ° C gacha bo'lgan suv hammomida vakuum ostida quruqgacha distillashtiriladi. Quruq qoldiq miqdoriy ravishda xloroform - metil spirti (1: 1) aralashmasi yordamida kalibrlangan 3 ml piknometrga o'tkaziladi. Olingan eritma xromatografiyaga uchraydi.

Xromatografiya sorbent (talk) yupqa qatlamida olib boriladi. 13x18 sm o'lchamdagi tayyorlangan xromatografik plastinkada pastki chetidan 1,5 sm masofada boshlang'ich chiziqni belgilang. 0,01 ml glikozid eritmasidan ikki nuqta va 0,01 ml abitsin eritmasidan dog '("guvoh") boshlang'ich chizig'iga burun bilan kapillyar ichiga tortilgan pipetka qo'llaniladi. Plastinka kameraga joylashtirilgan va 30-35 daqiqa davomida ko'tarilgan holda xromatografiya qilingan. Ko'chma fazaning yo'l uzunligi 12 sm.Tizim ko'chma faza sifatida ishlatiladi: xloroform-etil spirt-benzol-formamid (59: 10: 30: 1).

Plastinka havoda 5 daqiqa davomida quritiladi, so'ng t = 120 ° S haroratda pechda 10 daqiqa davomida quritiladi. Plastinaning yarmi ("guvoh" ning joyi va ekstraktsiyaning 1 joyi) xloramin B ning 0,2% eritmasi qo'shilgan holda etil spirti tarkibidagi trikloroatsetik kislotaning 25% eritmasi bilan ishlov beriladi, ishlov berilgandan so'ng plastinka quritiladi T = 120 ° S haroratda pechda 10 daqiqa. Lanatozidlar kulrang-ko'k dog'lar ko'rinishida ko'rinadi. To'liq chegaralar ultrabinafsha nurlarda o'rnatiladi. Lanatosid A yorqin sariq rangli lyuminestsentsiyaga ega; lanatosid B - yashil-ko'k; lana-tosid C - ko'k.

(Ishlov berilmagan) plastinkaning ikkinchi gilamchasida lanatozid dog'lari rivojlangan tasma va ushbu tizimdagi lanatozid dog'larining R _f standarti bilan belgilanadi : A - 0,74; B - 0,43; C - 0,24.

Chegaralarni o'rnatgandan so'ng, A, B, C lanatozidlari dog'lari plastinkadan chiqariladi, miqdoriy ravishda No4 shisha filtrga o'tkaziladi va 20 ml xloroform - metil spirt aralashmasi bilan elitatsiya qilinadi (1: 1). Eluat vakuum ostida t = 50-60 ° S da suvli hammomda quriguncha bug'lanadi. Qoldiq tempera xonasida 5 ml ksantgidrolovogo reaktiv va sovuq suvda 5 daqiqa davomida soğutulan qaynoq suv hammomida isitiladi 5 min, kuluçkalanır 15-20 daqiqa qo'shildi uchun t Ur. Pushti rangdan qirmizi ranggacha rang paydo bo'ladi. Rangli eritma qalinligi 10 mm bo'lgan kyuvetaga joylashtiriladi va nazorat fonida SF-46 spektrofotometrida optik zichlik 528-532 nm da aniqlanadi. Sof sorbentdan chiqarilgan elit nazorat vazifasini bajaradi.

Quruq xom ashyo tarkibidagi lanatosid miqdori quyidagi formula bo'yicha hisoblanadi:

bu erda, a - kalibrlash grafigi bo'yicha topilgan moddaning miqdori, V _{1 -} ekstraktning hajmi, ml (piknometr), V _{2 -} plastinkaga qo'llaniladigan ekstraktning hajmi, ml ; m - mutlaqo quruq xom ashyo namunasining og'irligi, g; 1.05 - bu tuzatish omilidir.

Xromatografik plitalarni tayyorlash. 4 g talk 25 ml kolbaga solinadi, 7 ml 95% etil spirt va 1 ml formamid - aseton (3: 7) aralashmasi qo'shiladi. Aralash 30-40 s davomida chayqatiladi va plastinka ustiga quyiladi, butun maydon bo'ylab bir tekis taqsimlanadi. Plitalar havo tandirda bir yilda 20-25 daqiqa va 10 daqiqa davomida quritilgan t = 50 - 60 ^ning faqat yangi plitalar zarur xromatografiya uchun S..

Kamerani xromatografiyaga tayyorlash. Ko'chma faza sifatida ishlatiladigan tizim 95% etil spirt - benzol - xloroform - formamid (10: 30: 59: 1). Tizim ajratuvchi voronkaga joylashtiriladi va 10 daqiqa davomida chayqatiladi, so'ngra 10 daqiqa davomida himoya qilinadi. Formamidning yuqori qatlami kameraga tushmasligi uchun kameraga quying. Kameraning to'yinganligi 20-25 daqiqa davom etadi. Kamerani yaxshiroq to'yinganligi uchun devorlar filtr qog'oz bilan yotqizilgan.

Kameraning tashqi tomoni qora qog'oz bilan qoplangan bo'lishi kerak. Keyingi xromatografiya paytida tizim o'zgarishi kerak.

1. Ksidhidrol reaktivini tayyorlash. 99 mg muz sirka kislotasida 10 mg ksanthidrol eritiladi va 1 ml konsentrlangan xlorid kislota qo'shiladi.

2. Xloramin B ning 0,2% eritmasi qo'shilgan trikloroatsetik kislota 25% eritmasi - rivojlanishdan oldin darhol tayyorlanadi.

3. Huquqiy reaktsiyani amalga oshirish. Tayyorlang "ex tempore" 1-5% natriy nitroprussid eritmasi (bir balona tayyorlangan) va 2-10% natriy gidroksid eritmasi (suv): 2 echimlar. Bug'lanadigan stakanda 3-4 tomchi ekstrakt quruq bo'lguncha bug'lanadi, 0,5 ml metil yoki etil spirtida eritiladi. Erigan quruq qoldiq probirkaga quyiladi va 1-2 tomchi reaktiv 1 qo'shiladi, so'ngra 1-2 tomchi reaktiv 2 devor bo'ylab ehtiyotkorlik bilan qo'shiladi va silkitmasdan ular qarashadi. Agar yurak glikozidlari bo'lsa, u holda eritmalar chegarasida halqa shaklida qizil rang paydo bo'ladi.

4 . Kalibrlash grafigini qurish . Kalibrlash grafigi lanatosid C (selanid) ning standart eritmasi yordamida chiziladi. 25 mg selanid 25 ml metil spirt - xloroform aralashmasida (1: 1) hajmli kolbada eritiladi. 0,01 dan 0,08 ml gacha bo'lgan eritmada xromatografik plastinka ustiga qo'llang va keyin sinov ekstrakti bilan davom eting.

Foxglove barglarida yurak glikozidlarini miqdoriy aniqlash usuli (Folia Digitalis, Evropa farmakopeyasi).

Xom ashyoning analitik namunasi diametri 2 mm bo'lgan teshiklari bo'lgan elakdan o'tib, zarracha kattaligiga qadar eziladi. 0,25 g (aniq tortilgan) ezilgan xom ashyo hajmi 150 ml bo'lgan kolbaga solinadi, 50 ml suv qo'shiladi va tebranish moslamasida 1 soat davomida chayqatiladi. Qo'rg'oshin atsetatning 15 ml eritmasidan 5 ml qo'shing va yana 5 daqiqa chayqatishda davom eting, shundan so'ng 7,5 ml natriy vodorod fosfatning 4% li eritmasi qo'shiladi. Keyin ekstraktsiya burma qog'ozli filtr orqali filtrlanadi. 50 ml filtrat 5 soatlik xlorid kislota (150 g / l HCl) bilan suv hammomida 1 soat davomida qayta oqim ostida isitiladi. Gidrolizat ajratuvchi voronkaga o'tkaziladi, kolba har biri 5 ml bilan ikki marta suv bilan yuviladi, gidrolizatga qo'shiladi va har biri 25 ml bilan uch marta xloroform bilan ishlov beriladi. Xloroform ekstraktlari birlashtirilib, suvsiz natriy sulfat orqali o'tkaziladi va eritma hajmi 100 ml hajmdagi kolbada xloroform bilan belgiga keltiriladi. Natijada paydo bo'lgan xloroform eritmasidan 40 ml quruqlikka qadar bug'lanadi. Quruq qoldiq 7 ml 50% spirtda eritiladi, 2 ml 2% dinitrobenzoik kislota spirtli eritmasi va 1 ml 1 mol / l natriy gidroksid eritmasi qo'shiladi.

Yurak glikozidining standart eritmasi quyidagicha tayyorlanadi: 50 ml diitoksinni alkogolda eritib, eritmaning hajmini spirtli 50 ml hajmli kolbada belgigacha (A eritma) keltiring. 5 ml A eritmasi hajmi 50 ml bo'lgan kolbaga joylashtiriladi va eritma hajmi spirtli ichimlik bilan (B eritmasi) belgiga keltiriladi. 5 ml B eritmasiga 25 ml suv va 3 ml xlorid kislota (150 g / l HCl) soling, eritmani qaytarma ostidagi suv hammomida 1 soat qizdiring. Keyin, yuqorida aytib o'tilganidek tayyorlang.

540 nm to'lqin uzunlikdagi ikkita eritmaning optik zichligini 12 daqiqa davomida optik zichlik maksimal darajaga yetguncha bir necha marta o'lchab ko'ring. Taqqoslash eritmasi sifatida 7 ml 50% spirt, 2 ml dinitrobenzoik kislota eritmasi va 1 ml 1 mol / l natriy gidroksid eritmasidan iborat aralashma ishlatiladi.

Raqamli oksin bo'yicha yurak glikozidlarining tarkibi foizda (X) quyidagi formula bo'yicha hisoblanadi:

bu erda, D ₀ - raqamoksinning standart eritmasining optik zichligi; D _n - tekshirilayotgan eritmaning optik zichligi; m ₀ - raqamoksin namunasining og'irligi, g; m _n - xom ashyo namunasining og'irligi, g; W - xom ashyoni quritish paytida massadagi yo'qotish,%.

Kardiyoglikozidlar miqdorining raqamoksin bo'yicha miqdoriy tarkibi kamida 0,08% bo'lishi kerak (Evropa farmakopeyasi PhEur talablariga muvofiq).