Mavzu: Oqsillardagi barqarorlik va aylanish

Gidroliz
Gidroliz oqsil namunasini 6 M da qizdirish orqali amalga oshiriladi xlorid kislota 24 soat yoki undan ko'proq vaqt davomida 100-110 ° S gacha. Ko'p miqdordagi oqsillar hidrofob guruhlar uzoqroq isitish davrlarini talab qilishi mumkin. Ammo, bu holatlar shunchalik kuchliki, ba'zi aminokislotalar (serin, treonin, tirozin, triptofan, glutaminva sistein) tanazzulga uchragan. Biokimyo Onlayn ushbu muammoni chetlab o'tish uchun har xil vaqt uchun alohida namunalarni isitishni, har bir olingan eritmani tahlil qilishni va gidrolizning nolga teng vaqtiga ekstrapolyatsiyani taklif qiladi. Rastall degradatsiyani oldini olish yoki kamaytirish uchun turli xil reagentlarni taklif qiladi, masalan tiol reaktivlar yoki fenol triptofan va tirozinni xlor va oksidlanishdan oldin sistein ta'siridan himoya qilish.
II BOB Protein barqarorligi sensorlarining tuzilishi va mexanizmi: kichik issiqlik zarbasi oqsillarining chaperon faolligi
2.1. Peptid bo'laklariga hazm qilish. Folding sekvensori
Aminokislotalarni ajratish mumkin ion almashinadigan xromatografiya keyin ularni aniqlashni osonlashtirish uchun derivatsiya qilingan. Odatda, aminokislotalar hosil bo'ladi, so'ngra eritiladi teskari faza HPLC.
Ion almashinadigan xromatografiyaning namunasi MTRK tomonidan sulfatlangan polistirolni matritsa sifatida ishlatib, aminokislotalarni kislota eritmasiga qo'shib va ​​doimiy ravishda ortib boruvchi buferdan o'tkaziladi. pH ustun orqali. Aminokislotalar pH mos keladigan darajaga yetganda elutatsiya qilinadi izoelektrik nuqtalar. Aminokislotalarni ajratib bo'lgach, ularning ranglarini hosil qiluvchi hosil qiluvchi reaktiv qo'shib ularning tegishli miqdori aniqlanadi. Agar aminokislotalarning miqdori 10 nmoldan oshsa, ninhidrin buning uchun ishlatilishi mumkin; u prolin bilan reaksiyaga kirishganda sariq rang, boshqa aminokislotalar bilan esa jonli binafsha rang beradi. Aminokislota kontsentratsiyasi hosil bo'lgan eritmaning yutilishiga mutanosibdir. Juda oz miqdorda, soat 22.00 gacha, lyuminestsent hosilalar, masalan, reagentlar yordamida hosil bo'lishi mumkin orto-ftaldegid (OPA) yoki floresamin.
Ustundan oldingi derivatizatsiya ultrabinafsha nurlari bilan aniqlanadigan lotin hosil qilish uchun Edman reaktividan foydalanishi mumkin. Kattaroq sezgirlikka lyuminestsent lotin hosil qiluvchi reaktiv yordamida erishiladi. Hosil bo'lgan aminokislotalar, odatda C8 yoki C18 yordamida teskari fazali xromatografiyaga uchraydi. kremniy kolonu va optimallashtirilgan elution gradient. Elitatsiya qiluvchi aminokislotalar ultrabinafsha yoki lyuminestsentsiya detektori yordamida aniqlanadi va


1 Bogosian G, Violand BN, Dorward-King EJ, Workman WE, Jung PE, Keyn JF (yanvar 1989). "Escherichia coli tomonidan biosintez va norleusin


namunadagi har bir aminokislotani miqdorini aniqlash uchun hosil bo'lgan standartlar bilan taqqoslaganda eng yuqori joylar.