Mavzu : Restriksiya usullari

III turdagi restriktiv fermentlar
III turdagi restriksion endonukleazalar faqat ikkita subbirlikdan iborat bo'lib, biri DNKni tanib olish va o'zgartirish uchun, ikkinchisi ketma-ketlik uchun javobgardir.
Ushbu fermentlar o'z funktsiyalari uchun ikkita kofaktorni talab qiladi: ATP va magniy. Ushbu turdagi cheklash fermentlari ikkita assimetrik tanib olish joyiga ega bo'lib, DNKni ATP ga bog'liq holda translokatsiya qiladi va uni tanib olish joyiga 20-30 bp oralig'ida kesib tashlaydi.
IV turdagi cheklash fermentlari
IV turdagi fermentlarni aniqlash oson, chunki ular DNKni metilatsiya belgilari bilan kesishadi, ular DNK ketma-ketligini tanib olish va kesish uchun mas'ul bo'lgan turli xil subbirliklardan iborat.Ushbu fermentlar kofaktor sifatida GTP va ikki valentli magniydan foydalanadilar.
Maxsus dekolte joylariga nuklein kislotalarning bir yoki ikkala ipida metilatlangan yoki gidroksimetillangan sitozin qoldiqlari bo'lgan nukleotid iplari kiradi.
V turdagi cheklash fermentlari
Ushbu tasnif CRISPER-Cas tipidagi fermentlarni guruhlarga ajratadi, ular bosqinchi organizmlarning o'ziga xos DNK ketma-ketliklarini aniqlaydi va kesadi. Cas fermentlari, invaziv organizmlarni tanib olish va ularga hujum qilish uchun CRISPER sintez qilingan qo'llanma RNK zanjiridan foydalanadilar.
V tipiga kiruvchi fermentlar I, II va II turdagi fermentlar bo'yicha tuzilgan polipeptidlardir. Ular deyarli har qanday organizmning DNK qismlarini va keng uzunlikdagi kesimlarini kesib olishlari mumkin. Ularning egiluvchanligi va ulardan foydalanish qulayligi bu fermentlarni II turdagi fermentlar qatori hozirgi kunda gen muhandisligida eng ko'p ishlatiladigan vositalardan biriga aylantiradi.
Hozirgi vaqtda bakteriyalarni turli maqsadlar uchun transformatsiyalashda ishlatiladigan vektorlarda ko'p miqdordagi cheklash fermentlarini aniqlash joylari topilgan multiklonlash joylari mavjud.
Ushbu fermentlar orasida eng mashhurlari birinchi marta olingan va tavsiflangan EcoRI, II, III, IV va V hisoblanadi. E. coli; HindIII, dan H. grippi va BamHI B. amiloliquefaciens