Mavzu : Restriksiya usullari

I turdagi cheklash fermentlari
Ushbu fermentlar uchta subbirlikga ega bo'lgan besh pentamerik oqsillardir, biri cheklash uchun, biri metilatsiya uchun, ikkinchisi DNKda ketma-ketlikni aniqlash uchun. Ushbu endonukleazalar cheklash va modifikatsiya reaktsiyalarini katalizatsiyalashga qodir bo'lgan ko'p funktsiyali oqsillar bo'lib, ular ATPaza faolligiga va DNK topoizomerazasiga ega.
Ushbu turdagi fermentlar kashf etilgan birinchi endonukleazalar bo'lib, ular birinchi marta 1960 yillarda tozalangan va shu vaqtdan buyon chuqur o'rganilgan.
I turdagi fermentlar biotexnologik vosita sifatida keng qo'llanilmaydi, chunki dekolte zonasi tanib olish joyidan 1000 tagacha juftlikgacha o'zgaruvchan masofada bo'lishi mumkin, bu esa ularni eksperimental takrorlanish nuqtai nazaridan ishonchsiz qiladi.
II turdagi restriktiv fermentlar
Ular homodimerlar yoki tetramerlardan tashkil topgan fermentlar bo'lib, ular DNKni uzunligi 4 dan 8 bp gacha aniqlangan joylarda kesishadi. Ushbu bo'linish joylari odatda palindromikdir, ya'ni ular har ikki yo'nalishda ham bir xil tarzda o'qiladigan ketma-ketlikni taniydilar.
Bakteriyalardagi II turdagi restriktiv fermentlarning aksariyati DNKni begona xususiyatini tanib bo'lgach, uni kesib tashlaydi, chunki u o'z DNKida bo'lishi kerak bo'lgan odatiy modifikatsiyaga ega emas.
Bular eng sodda restriksiyon fermentlari, chunki ular magnezium (Mg +) dan boshqa kofaktorni tanib olish va DNK ketma-ketligini kesish uchun zarur emas.
DNKdagi oddiy ketma-ketliklarni aniq pozitsiyalarda aniqlash va kesishda II turdagi restriktiv fermentlarning aniqligi ularni molekulyar biologiyaning ko'pgina sohalarida eng ko'p ishlatiladigan va ajralmas qismiga aylantiradi.
II turdagi restriktiv fermentlar guruhi ichida har biriga xos bo'lgan ba'zi xususiyatlariga ko'ra tasniflangan bir nechta subklasslar mavjud. Ushbu fermentlarni tasnifi ferment nomidan keyin A dan Z gacha alifbo harflarini qo'shish orqali amalga oshiriladi.
O'zlarining foydaliligi bilan mashhur bo'lgan ba'zi bir kichik sinflar:
II sinf
Ular turli xil subbirliklarning dimerlari. Ular assimetrik ketma-ketlikni taniydilar va kesuvchi fermentlarni yaratish uchun ideal kashshoflar sifatida foydalanadilar.
IIB subklassi
Ular bir yoki bir nechta dimerlardan tashkil topgan va tanib olish ketma-ketligining ikkala tomonida kesilgan DNK. Ular tanib olish joyi oldidan DNKning ikkala ipini tayanch juftlik oralig'ida kesib tashladilar.
IIC subklassi
Ushbu turdagi fermentlar DNK zanjirlarining bo'linishi va modifikatsiyasi funktsiyalari bo'lgan polipeptidlardir. Ushbu fermentlar ikkala ipni ham assimetrik tarzda kesishadi.
IIE subklassi
Ushbu subklass fermentlari gen injeneriyasida eng ko'p ishlatiladi. Ular katalitik maydonga ega va odatda allosterik effektorni talab qiladi. Ushbu fermentlar samarali dekolte qilish uchun ularni tanib olish ketma-ketligining ikki nusxasi bilan o'zaro ta'sir qilishlari kerak. Ushbu subklass tarkibida EcoRII va EcoRI fermentlari mavjud.