Лабораторные работы по предмету микробиология, вирусология и иммунология

ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫ №15
«ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ (ИФА). ПРЯМЫЕ И КОСВЕННЫЕ (СЭНДВИЧ) МЕТОДЫ».
Цель лабораторной работы.
Ознакомление с методами серологической диагностики инфекционных заболеваний – иммунноферментный анализ (ИФА) – прямые и непрямые (сэндвич) методы.
Педагогические задачи
- Объяснить значение прямых и непрямых (сэндвич) методов ИФА реакций для диагностики инфекционных заболеваний;
-Объяснить сущность и механизм прямых и непрямых (сэндвич) методов ИФА.
Результаты лабораторной работы.
-студент должен знать:
- значение метода ИФА для диагностики инфекционных заболеваний;
- знать сущность и механизм прямых и непрямых (сэндвич) методов ИФА .
Студент должен выполнить:
- самостоятельно реакцию иммунноферментного анализа
-интерпретацию полученных результатов
- применение на практике результатов ИФА.
Теоретическая часть
Иммунные реакции и их значение в практике здравоохранения.
Реакции между антигенами и антителами invitro или серологические реакции широко используются в микробиологических и серологических (иммунологических) лабораториях с самыми разнообразными целями:
серодиагностика бактериальных, вирусных, реже других инфекционных заболеваний, сероидентификация выделенных бактериальных, вирусных и других культур различных микроорганизмов
Сероидентификацию микробных культур проводят для определения их вида, серовара с помощью наборов специфических антисывороток, также выпускаемых коммерческими фирмами.
Каждая серологическая реакция характеризуется специфичностью и чувствительностью. Под специфичностью понимают способность антигенов или антител реагировать только с гомологичными антителами, содержащимися в сыворотке крови, либо с гомологичными антигенами, соответственно. Чем выше специфичность, тем меньше ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
Серологические реакции можно применять в двух целях:

1. 
   Определение количества антител известным количеством антигенов
   
2. 
   Определение вида антигена или микроба при помощи иммунных сывороток.
   

Результаты реакции зависят от физического состояния антигена и условий проведения реакции.
В связывании антигена и антитела различают специфические и неспецифические этапы. В первом (специфическом) этапе происходит связывание детерминантных групп гаптенов и антиген с активным центром антител. Соединение антигена и антитела в изотоническом растворе осаждается и считается вторым неспецифическим способом.
Если в серологических реакциях участвуют низкодисперсные антигены (бактерии и клетки), тогда происходит реакция агглютинации. Если антитела связываются с высокодисперсными антигенами (полисахариды, белки и их соединения), то образуются преципитаты (флоккуляты).