Лабораторные работы по предмету микробиология, вирусология и иммунология

Определение результата реакции можно с помошю волны с длиной 400 нм на спектре фотометра и световым фильтром с референсом 620-680 нм. Реакцию проведенной можно считать тогда, когда оптическая плотность К+ ямке составлает не менее 1,0 (ОП) и К-минус не более 0,15. Например, если исследуемый образец определяется длиной волны в 400 нм, в таком случае реакция считается положительной, если оптическая плотность К+ не менее 1 и К- не больше 0,2.(ОП К- составляет 0,2)
ОП крит.=ОПК-(ср.)+0,2
При визуальном осмотре оценивается окраска в лакунах после инкубации субстрата со смесью. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству связанных антител. Нужно отметить, что реакции иммунного фермента и иимуноблотинга отличаются своей скоростью и чувствительностью, результаты учитываются через 4-6 часов. Реакция не дает положительных результатов при исследовании ВИЧ инфицированных новорожденных, потому что болезнь передаётся от зараженной матери и IgG сохраняются в течение года. Для этого применяют альтернативные методы, т.е выделяют вирусы invitro или основан на определении генома вируса при помощи ПЦР.
Лабораторная работа. Постановка твердофазной ИФА реакции (сэндвич) с сывороткой крови ВИЧ инфицированного новорожденного.
Цель: Знакомство со значением и механизмом реакции твердофазной ИФА
Необходимые ингредиенты: ИФА-анализатор, специальный набор для постановки ИФА, 96⁰ спирт, исследуемая сыворотка больного, шарики и тампоны.
Ход работы (по шагам)

№	Выполняемые задачи	Не выполнил (балл)	Выполнил (балл)
1	В иимуносорбентные лакуны планшета капаем 0,25мкл рабочего раствора конъюгата ВИЧ-1. Затем в лакуны планшета добавляем 0,75 мкл контрольного образца ( К+, К- ).	0	20
2	Ингредиенты в лакунах тщательно перемешивают (медленным постукиванием на край планшета).Закрываем крышку планшета и оставляем при температуре 37º С на 60 минут.	0	15
3	Ингредиенты в планшете выливаются в сосуд с дез.раствором с помощью вошера, планшет 4 раза промывают рабочим раствором моющей жидкости. Каждай раз придерживают в моющем растворе по 40 сек и выливают в дез раствор.	0	15
4	В каждые лакуны стрипа помещают 100 мкл СС (смесь субстрата, буферный раствор). Закрывают крышку планшета при температуре 37º С на 30 мин	0	15
5	Ингрдиенты из планшета при помоши вошера переносится в дезраствор, планшет промивается 4 раза	0	15
6	Для остановки реакции в лакуну планшета добавлается 100 мкл стоп реагента и результаты расматривается через 1-2 минуты.	0	20
Результат		0	100

Приложение-результаты ИФА реакции рссматриваются в лаборатории на 5 этаже, группы скускаются поочередно, результаты записываются в тетради.