Laboratoriya mashg‘ulotlari

Muhitni ushlab turish. 

Peptonli kazein agar. 

Tarkibi: 

Pepton  

 

 

 

 

6,0 g 

Pankreatik kazein sho‗rvasi   

4.0g 

Achitqi ekstrakti  

 

 

 

3.0 g 

Go‗sht ekstrakti  

 

 

 

1,5 g 

Dekstroza  

 

 

 

 

1,0 g 

Agar     

 

 

 

15.0g 

Distillangan suv  

 

 

 

1000 ml 

rn kattaligi:    

 

 

6.55 ±0,05 

Avtoklavda 20 daqiqada 121 °S haroratda sterilizatsiya qiliniladi. 

Reaktiv: Etanol. 

Ingibitor eritmasi:  10%  (mg/ml ) formaldegid ning tuzli eritmasi. 

Tayyorlanishi: 

0,85  g  natriy  xloridni  erishigini  ta‘minlovchi  suv  hajmi  bilan  90  ml  hosil  bo‗lguncha 

tayyorlaniladi. 10 ml 40% farmaldegid qo‗shiladi. 15°S kam bo‗lmagan haroratda saqlaniladi, 

yorqin yorug‗lik tushmasligi kerak. 

Test mikrorganizm: Streptococcus Faecalis (ATCC 10541) 

Test mikroorganizmini tayyorlash: 

Streptococcus Faecalis (ATCC 10541) ni 100 ml ozuqaviy sho‗rvasida ushlab turiladi. Testni 

o‗tkazish uchun yangi tayyorlangan sub kultura tayyorlanadi, bu usulda ma‘lum miqdordagi 

keltirilgan  pepton  kezein  agarda  tayyorlangan  kulturani  aralashtiriladi  va  100  ml  oziqaviy 

sho‗rvada  16-18  soat  37°S  haroratda  inkubatsiya  qiliniladi.  Miqdori  tahlil  har  kungi 

inokulyatni 6 ml subkulturani har 1000 ml oziqaviy sho‗rvada ishlatilib o‗tkaziladi. 

Ishchi standart eritmani tayyorlash: 

50  mg  standartni  3  soat  davomida  60  °S  harorat,  5  mm  simob  ustunida  quritiladi.  Aniq 

tortilgan  moddani  etanolda  eritib,    ishchi  standart  eritmani  100  mkg/ml  konsentratsiyasini 

olinadi. Olingan eritmani muzlatgichda saqlab 30 kun mobaynida ishlatiladi. 

To„ldiriluvchi namunani tayyorlanishi: 

50 mg to‗ldiruvchilarni 3 soat davomida 60 °S harorat, 5 mm simob ustunida quritiladi. 

 

A) 25 mg 

 

→ 

25 ml 

B)1 ml A  

 

→ 

100 ml 

S)5 ml A  

 

→ 

50 ml 

D)  4 ml S  

 

→ 

100 ml ( 0,04 mkg/ml) 

(Hamma suyultirishlar etanolda olib boriladi) 

Tekshirilayotgan eritmani tayyorlanishi 

2 ml namunani etanol bilan eritib hajmni 100 ml etkaziladi, va so‗ng olingan etanolli 

grammitsidin 0,04 mkg/ml konsentratsiyasini olinadi (hisob kitob qilinib). 

---

346 

 

Tahlil: 

har  kungi  ishlatiladigan  standart  eritmani  ishchi  standart  eritmasidan  alikvotni 

suyultirilib  tayyorlanadi.  1  ml  eritmani  ishchi  eritmasini  standart  etanoli  bilan  100  gacha 

suyultirilib, 10 mkg/ml konsentratsiyali grammitsidin hosil bo‗lguncha olinadi. 2,8 ml, 3,4 ml, 

4,0 ml, 4,8 ml va 5,8 ml olingan eritmadan tanlab olib 100 ml gacha etonol bilan suyultiriladi, 

0.028,  0.034,  0.4,  0.048  va  0.058    mkg/ml  konsentratsiyali  grammitsidin  hosil  bo‗lguncha 

olinadi.  0,1  ml  olingan  konsentratsiyali  har  standart  va  tekshiriluvchi  namunani  3  ta  bir  xil 

o‗lchami 18 mm × 150mm li bo‗lgan probirkalarga solinadi. Har bir probirkaga test o‗tkazish 

uchun  9  ml  o‗stirilgan  sho‗rvadan  solinadi  va  suv  hammomida  3-4  saot  37°S  haroratda 

qizdiriladi. O‗sishni to‗xtatish uchun bitta seriyadagi probirkaga ekilgan sho‗rvani quyib, 0,2 

ml 10% farmaldegid eritmasidan qo‗shiladi. 

Probirkalar  inkubatsion  davrdan  so‗ng  suv  hammomidan  olinadi  va  har  biriga  0,2  ml 

10% farmaldegidning tuzli eritmasidan qo‗shiladi va yaxshilab eritiladi. 

Gazlar  erkin  chiqib  ketishi  uchun  probirkalarni  15  min  ga  qoldirib  qo‗yiladi.  Har  bir 

probirkadagi  xiralik  kattaligini,  to‗lqin  uzunligi  580  nm  bo‗lgan  kalorimetr  yordamida 

aniqlaniladi, solishtirish eritmasi sifatida farmolizlangan sho‗rva ishlatiladi. 

Gramitsidan faolligini hisoblash: 

o‗rtacha  kattalik  qiymatining  absorbsiyasi  har  bir  standart  uchun  ikki  siklli  yarim 

logarifmik  grafikka  chiqartiriladi.  Unda  absorbsiya  -  arifmktik  shkala,  konsentratsiya  esa 

logarifmik  shkala  bilan  belgilanadi.  Namuna  absorbsiyasining  o‗rtacha  kattaligi  olinib, 

gramitsidin konsentratsiyasi esa standart egriligi balan hisoblanadi. 

Namunadagi  gramitsidin  tarkibini  olish  uchun  mos  bo‗lgan  suyultirish  faktorini 

konsentratsiyaga ko‗paytirish orqali topiladi. 

Ko„rsatma: 

Rossiya  farmakopeyasiga  binoan,  agarga  Bacillus  cereus  var  mycoides  537  qo‗llab 

diffuziya qilish uculini gramitsidin faolligini aniqlash ham qo‗llanilishi mumkin.  

Turbidimetrik  va  agarda  diffuziya  usullarida  natijalarni  farqlanishi  kuzatilsa, 

turbidimetrik usuli tanlaniladi.