Laboratoriya mashg‘ulotlari

Tarixi: 

№1 Bosmasi   

 

Sana    

 

O„zgartirish sababi 

Bosma 001 

 

24.04.2000 

 

 

Birinchi bosmasi 

―Xexest Marion Russel‖ korxonasini  

―Avetis Farma LTD‖ nomini o‗zgartirilishi  

Bosma 002 

 

 

10.12.2001 

 

 

Rossiya farmakopeyasiga binoan 

gramitsidinning miqdoriy  

tahlilni aniqlashda alternativ usuli  

agardagi diffuziya usulidir. 

 

Framitsetin sulfat miqdoriy tarkibini aniqlash 

Tekshirishlarni korxona usuliga mos keluvchi agarda diffuziya usulida aniqlaniladi.  

Framatsidin  sulfatni  takribini  namunadagi  dori  vositasida  aniqlaniladi:  5  ml  namunani 

mos keluvchi erituvchi bilaneritib  100 mg/ml framitsitin eritmasi olinadi, va qaytiiriladi. 

Tahlil: 

Agarda diffuziya usulida tekshiriliarni olib boriladi. 

Kichik plastinalar usuli. 

Dozalar nisbati 4:1. 

Muhit: 

1) Ushlab turuvchi muhit (Maintenance medium): A IP96  muhiti 

2) Spora olish uchun muhit (Spore suspension medium): A IP96  muhiti 

3)  Faolligini  aniqlash  uchun  muhit  (Assay  medium)  :Oziqaviy  agar  ning  rn  kattaligi 

sterilizatsiyadan so‗ng 8,0±0,1. 

---

347 

 

Bufer eritmasi: 0,1 M fosfat buferi, rn 8,0. 

Tayerlanishi: 

16,73 g ikki o‗rinni bosuvchi kaliy fosfat 

0,523  g bir o‗rinni bosuvchi kaliy fosfat 

YUqorida  ko‗rsatilgan  miqdordagilarni  eritiladi  va  eritmaning  hajmni  1000  ml  gacha 

distillangan  suv  bilan  etkaziladi.  Eritmani  rn  kattaligini  fosfor  kislotasi  yoki  10N  kaliy 

gidroksid bilan aniqlashadi (rn kattaligi sterilizatsiyadan so‗ng 8,0±0,1). 

Mikroorganizm – testini tayyorlash. 

Sterilligini  tekshirish  uchun  qattiq  yopiilgan  prbirkalarni  inkubirlanadi,    24  soat 

davomida muhitni saqlanadi. Har bir probirkaga petli kosachasiga vegetativ organizmini engil 

sim  orqali    inokulyat  ekiladi.  Inkubatsiya  jarayoni  probirkalarda  16  soat  mobaynida    37°S 

haroratda , so‗ng boshlang‗ich  4°S haroratda saqlanadi. Tarkibiy qatlamini Rouks bankasiga 

250 ml muhit A ni 0,3 g/l magniy sulfat bilan inokulyasiya qilinadi. 

Rouks  bankasini  inkubirlanishi  7  kun  mobaynida  37°S  haroratda  olib  boriladi.  Agar 

sirtini 100 steril tozalangan suv bilan shishali dumaloqchalarni yordamchi suspenziya sifatida 

ishlatilib yuviladi. Buning natijasida suspenziyaga yig‗iladi. 

Boshlang‗ich  suspenziyani  suv  hammomida    30  daqiqa  mobaynida    60°S  haroratda 

qizdiriladi  va    4°S  haroratda  saqlanadi.  Bu  jarayonni  3  kun  mobaynida  qaytiriladi.  Bu 

suspenziya  3  oy  davomida  ishlatiladi.  Ishlatishdan  oldin  boshlang‗ich  suspenziyani  60% 

darajasida  suvni  o‗taqazishigcha  suyultirilib  580  nm  to‗lqin  uzunligida  mos  bo‗gan 

kalorimetrda  tekshiriladi. 

Framitsitin sulfat standarti (har yildagi tayyorlanish:) 

Framitsit sulfatga mos bo‗lgan miqdorda 10 g (10 g atrofida) Noecht Marin Roussel dan 

olib kelingan, partiyadan tanlab olinib, tashqi standart sifatida belgilanadi. 

Tashqi  standart  standartlashda  Noecht  Marin  RousselReference  standartini  ishlatib, 

tashqi standart sifatida belgilanadi. 

Boshlang„iya standart eritmasi: 

aniq  tortma  olinadi  va  framitsit  sulfatga  mos  bo‗lgan  miqdorda  (tashqi  standart)  steril 

tozalangan  suvda  shunday  eritiladi  1000mg  /  ml  boshlang‗ich  eritmasi  standart  eritmasiga 

o‗xshab belgilanishi kerak bo‗ladi. 

Framitsitin sulfat standartining ishchi eritmasi  (har haftadagi tayyorlanish:) 

10 ml standart eritmasni mos bo‗lgan bufer eritmasi bilan rn 8,0 bo‗lgan, 50 ml o‗lchov 

kolbasida (200 mg/ml) eritiladi. 

Framitsitin  sulfat  standartieritmasini  yuqori  va  past  konsentratsiyasi  (har  kundagi 

tayyorlanish:) 

 2,5  ml  (200  mg/ml)  standart  eritmasini  fosfat  buferi  bilan  rn 8,0  bo‗lgan,  25  ml 

o‗lchov kolbasida (20 mg/ml) eritiladi. (SN) 

2,5  ml  (200  mg/ml)  standart  eritmasini  fosfat  buferi  bilan  rn 8,0  bo‗lgan,  100  ml 

o‗lchov kolbasida (5 mg/ml) eritiladi. (SL) 

Framitsitin sulfat ishchi standartining 20 mg/ml va 5 mg/ml konsentratsiyali eritmalarini 

ishchi doza uchun miqdoriy tahlilda ishlatiladi. Faollikni aniqlash uchun dozar nisbati 4:1. 

Tekshirilayotgan eritmani tayyorlash. 

Tekshirilayotgan  eritma  namunasining  ekstraktini  0,1M  fosfat  buferida  suyultirilib, 

rn 8,0  bo‗lgan  20  mg/ml  konsentratsiyasi  olinadi.  Olingan  eritmani  yuqori  konsentratsiyali 

ishchi  eritma  sifatida    ishlatiladi.  (TN)  So‗ng  yana    tekshirilayotgan  eritma  namunasining 

ekstraktini  0,1M  fosfat  buferida  suyultirilib,  rn 8,0  bo‗lgan  5  mg/ml  konsentratsiyasi 

olinadi.Olingan eritmani past konsentratsiyali ishchi eritma sifatida  ishlatiladi. (TL) 

 Sterillangan  Petli  likopchasini  (tashqi  diametri  9  sm  bo‗lgan)  avtoklavda  20  daqiqa 

mobaynida 121°S haroratda ishlov beriladi. 

Muhit  eritiladi  60°S  gacha  sovutiladi  va  13  ml  muhitni  har  bir  plastinkagalarga 

taqsimlanadi. Har bir namuna uchun minimal 4 ta plastina ishlatiladi. Qatlam asosni qotishini 

---

348 

 

kutiladi.  Qlogan  muhitni  60  °S  haroratda  ushlab  turilib  1%  li  B.  Subtilis    ATSS  6633 

suspenziyaga ekiladi. 

Aylanma  holatda    yaxshilab  arlashtiriladi  va  4  mldan  ikkinchi  qatlamga 

inokulyasiyalangan  muhitni  solinadi,  asosiy  qatlamni  bir  xil  taqlash  kerak  bo‗ladi.  Muhitni 

quyuqlashini kuzatiladi. 

Plastinkada  bir  hil  masofada  taqsimlab  o‗lchami  8  mm  misli  probkalar  orqali  4  ta 

chuqurchalar hosil qilinadi va agar muhitidan kesib olingan bo‗laklar yo‗qotiladi.  

50  mkl  standart  yuqori  va  past  konsentratsiyali  eritmadan  bir  biridan  diagonal 

joylashgan  chuqurchalarga solib qo‗yiladi.  

50  mkl  standart  yuqori  va  past  konsentratsiyali  eritmadan  qolgan  ikki  chuqurchalarga 

solib  qo‗yiladi.  Buning  natijasida,  standart  va  ishchi  eritmalar  turli  xil  chuqurchalarda  bitta 

plastinkada  joylashadi.  Plastinkalarni  xona  haroratida  60  daqiqa  qo‗yib  qo‗yiladi,  so‗ng    18 

soat  mobaynida    37°S  haroratda  inkubirlanadi  va  inkubatsiyalangan  muhitni  diametrini 

antibiotiklarni  muhitini  chegarasini  o‗lchovchi  asbob  orqali  hisoblab  topiladi.  Natijalarni 

kompyuter  orqali  to‗g‗rilanadi  va  tekshiriluvchi  namunaning  faolligini  foizlarda  hisoblab 

topiladi. 

Hisoblash: 

% Faolligi =Antilog 2 ± a log I 

bu erda: 



 







)

(

SL

SH

TL

TH

SL

SH

TL

TH

a















 

I = 

doza nisbati = SH:SL 





100

%Тахлил

Фаоллик

foiz tarkibini aniqlanishi 

Saqlanish muhiti (A IP 96 muhiti:) 

Pepton    

 

 

 

6,0 g 

Pankreatik kazein sho‗rvasi   

4.0g 

Achitqi ekstrakti  

 

 

 

3.0 g 

Go‗sht ekstrakti  

 

 

 

1,5 g 

Dekstroza  

 

 

 

 

1,0 g 

Agar  

 

 

 

 

 

15.0g 

Distillangan suv  

 

 

 

1000 ml 

Sterilizatsiya qilingandan  

so‗ng rn kattaligi:  

 

 

 

6.55 ±0,05 

Spora olish uchun muhit (A IP 96 muhiti:) 

Saqlanish muhiti (A IP 96 muhiti:) 

Pepton    

 

 

 

6,0 g 

Pankreatik kazein sho‗rvasi   

4.0g 

Achitqi ekstrakti  

 

 

 

3.0 g 

Go‗sht ekstrakti  

 

 

 

1,5 g 

Dekstroza  

 

 

 

 

1,0 g 

Marganets sulfat  

 

 

 

300 mg 

Agar  

 

 

 

 

 

15.0g 

Tozalangan suv  

 

 

 

1000 ml 

Sterilizatsiya qilingandan  

so‗ng rn kattaligi:  

 

 

 

6.55 ±0,05 

 

Anitibiotik foallini aniqlash uchun  muhiti (A IP 96 muhiti:) 

Pepton    

 

 

 

6,0 g 

---

349 

 

Achitqi ekstrakti  

 

 

 

3.0 g 

Go‗sht ekstrakti  

 

 

 

1,5 g 

Natriy xlorid 

 

 

 

5,0 g 

Agar  

 

 

 

 

 

15.0g 

Distillangan suv  

 

 

 

1000 ml 

Sterilizatsiya qilingandan  

so‗ng rn kattaligi:  

 

 

 

8,0 ±0,1