I. Обзор литературы

2.4.2. Определение липидного спектра крови и оксидантно-антиоксидантного статуса

Липидный спектр изучали путем определения ОХС, ХС ЛПВП, ТГ в сыворотке крови. Исследование проводили биохимическим методом с использованием экспресс - анализатора «Reflotron Plus» («Roche» Германия) в лаборатории кафедры факультетской терапии Андижанского медицинского института.

Кровь для исследования брали утром натощак, после 12-часового голодания, с предварительным исключением приема β-блокаторов, тиазидных диуретиков, алкоголя. Со­держание ХС ЛПОНП, ХС ЛПНП рассчитывали по формуле W. Friedwald:
ХС ЛПОНП (ммоль/л)= триглицериды х 0,45
ХС ЛПНП (ммоль/л)= ОХС - ХС ЛПВП - ХС ЛПОНП
Расчет ХС ЛПНП по формуле Friedwald правомерен в случае, когда концентрация триглицеридов менее 5 ммоль/л (450 мг/дл).
Дополнительно определяли интегральный показатель – индекс атерогенности по формуле, предло­женной А.Климовым:
ИА (ед)= (ОХС-ХС ЛПВП) : ХС ЛПВП
Концентрацию свободных жирных кислот в сыворотке крови определяли с помощью тест-системы NEFAFS фирмы «Disus» (Германия) на кафедре
биохимии (зав. кафедрой - д.м.н., проф. Ходжиметов А.А.) Ташкентской медицинской академии (ректор - акад. Каримов Ш.И.).
Определение оксидантного статуса проводили по уровню продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ). Для определения активности ПОЛ исполь­зовали метод В.Б. Гаврилова, А.Р. Гавриловой и А.М. Мажуль (1987) [37]. О со­держании продуктов ПОЛ судили по содержанию в сыворотке крови их вто­ричного продукта – малонового диальдегида (МДА), определяемого по реак­ции с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК). Исследование проводили в лаборатории ЦНИЛ (зав.- д.м.н., проф. Алейник В.А.) Андижанского медицинского института.
Метод основан на том, что при нагревании в кислой среде часть продуктов ПОЛ, относящихся к классу эндоперекисей, разлагается с образованием МДА, связывание молекулы которого с двумя молекулами ТБК приводит к формированию окрашенного комплекса.
В работе использовали свежеприготовленную сыворотку, полученную из крови здоровых доноров. В реакционную смесь, содержащую 3 мл рас­твора Н₃РО₄ с соответствующим рН и 1 мл 0,8% ТБК вносили 0,2 мл сыво­ротки. Регистрировали рН конечной смеси и инкубировали образец 45 мин. на кипящей водяной бане. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали окрашенный продукт 5 мл н-бутанола. В каждом образце ре­гистрировали оптическое поглощение и интенсивность флуоресценции, обу­словленные наличием продуктов ТБК – реакции.
Оптическую плотность водяных растворов и бутанольных экстрактов измеряли на спектрофотометре. Интенсивность флуоресценции определяли на спектрофлуорометре при γ=550-554 нм.
При проведении флуоресцентных измерений для приготовления стан­дартной пробы в реакционную смесь добавляли 0,2 мл 1,3- тетраметоксипропана, что соответствует содержанию 1 нмоль МДА в пробе. В контрольную группу добавляли 0,2 мл Н₂О. Концентрацию ТБК – актив­ных продуктов рассчитывали по формуле:
С= (Fu-Fk) х V
Fc-Fk
где Fu, Fc, Fk- соответственно интенсивность флуоресценции исследуемой, стандартной и контрольной проб; V - объём исследуемой сыворотки (0,2 мл).
Для определения антиоксидантного статуса организма проводили определение каталазы. Активность каталазы в сыворотке крови определяли по способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс [22]. Исследование проводили также в лаборатории ЦНИЛ Андижанского медицинского института.
Интенсивность развившейся окраски измеряли на спектрофотометре при γ = 410 нм. Активность каталазы расчитывали по формуле:
Е _{(МКАТ/Л)}= (А_ХОЛ - А_ОП) х V x t x К
где Е - активность каталазы; А - оптическая плотность (экстинция) холостой и опытной проб; V - объём пробы (0,1 мл); t- время инкубации (600 сек); К - коэффициент миллимолярной экстинции перекиси водорода, равный 22,2 х 10³ мМ^-1 х см^-1.