ВИРУС ГЕПАТИТА Е, ВГЕ
(Hepatitis E virus)
— возбудитель гепатита Е, ранее известного как гепатита ни-А, ни-В с
фекально-оральным механизмом передачи. Описан впервые М. С. Балаяном
и соавт. в 1983 г. по данным обследования экскретов добровольца,
экспериментально зараженного материалом от больных ГЕ людей. По
основным фенотипическим признакам ВГЕ мог бы быть причислен к
семейству калицивирусов, однако состав и организация его генома
полностью исключают эту таксономическую принадлежность. Можно лишь
предполагать, что ВГЕ в единственном пока числе представляет отдельный
род вирусов. Изоляты ВГЕ из различных географических регионов (Индия,
Бирма, Пакистан, Средне-Азиатские республики СНГ, Мексика) в антигеном
отношении сходны между собой, в пределах разрешающей способности
использованных для этих целей метода иммуноэлектронной микроскопии, а
также серологических реакций с рекомбинантными антигенами.
Частицы ВГЕ представляют собой округлые образования диаметром
около 32 нм (вариации от 27 до 34 нм), построенные из идентичных
структурных элементов и лишенные оболочки. Вирусным геномом является
одноцепочечная РНК позитивной полярности.
Клонирование генома вируса позволило характеризовать РНК ВГЕ по
химическому строению и генным функциям. Полноразмерная РНК
насчитывают около 7500 нуклеотидных оснований и включает в себя три
независимые открытые рамки считывания (ОРС), каждая из которых
кодирует синтез определенного белка или группы белков. Геном организован
таким образом, что на N — концевой аминокислотной последовательности
располагаются неструктурные белки, а на С-концевой — структурные.
Такое расположение белков свойственно калици- и тогавирусам, но не
пикорнавирусам. Отдельные структурные белки ВГЕ были экспрессированы
в кишечной палочке и с помощью бакуловирусного вектора в клетках
насекомых. Такие белки послужили антигенным аналогом ВГЕ при
разработке твердофазного иммуноферментного теста для определения
антител к вирусу (анти-ВГЕ), а также создания экспериментальных вакцин.
Частично очищенный ВГЕ седиментируется при 183S и имеет
плавучую плотность 1,29 в градиенте тартрата калия с глицеролом, по
другим данным в хлориде цезия выявляются две фракции ВГЕ,
соответствующие плотностям 1,30 и 1,35 г/см 3.
ВГЕ хорошо сохраняется при температуре —20° С и ниже, однако,
хранение при температурах выше 0° С и особенно последовательное
замораживание-оттаивание ведет к быстрому разрушению вируса. Он
чувствителен также к воздействию хлор- или йодсодержащих
дезинфектантов. ВГЕ не удавалось адаптировать к размножению в клеточных
культурах при использовании обычных методов культивирования, однако,
персистентная инфекция была достигнута, когда клетки печени и почек,
извлеченные из экспериментально зараженных обезьян на высоте
заболевания, ко-культивировали с "бессмертными" клеточными линиями.
Идентификация
ВГЕ
ранее
производилась
методом
иммуноэлектронной микроскопии, в настоящее время для этой цели широко
используются кДНК гибридизация и ПЦР. В специализированных научных
учреждениях для выделения может проводиться заражение лабораторных
приматов. Известно, что более 10 видов обезьян Старого и Нового Света
восприимчивы к гепатитной Е инфекции; но наиболее часто лабораторной
моделью ГЕ служат яванские макаки (Масаса fascicularis). О развитии
инфекции судят по:
повышению уровней сывороточных аминотрансфераз;
экскреции вируса с фекалиями;
образованию вирусспецифических антител; и
патоморфологическим изменениям печеночной ткани.
У зараженных ВГЕ обезьян значительно чаще, чем у больных людей,
отмечается двухфазный подъем аминотрансфераз, в частности, АлАТ:
первый приходится на 6-12 день после заражения, и второй — на 21-27 день.
Второй подъем, как правило, совпадает по времени с появлением
патоморфологических признаков острого гепатита.
В печени обезьян на высоте развития инфекции может быть обнаружен
антиген ВГЕ, выявляемый методом флюоресцирующих антител (МФА). Этот
антиген располагается в цитоплазме гепатоцитов в виде небольших
светящихся гранул на фоне сохранившейся структуры клеток.
В результате успешного клонирования генома ВГЕ стало возможным
изготавливать рекомбинантные и синтетические антигены, пригодные для
использования
в
серологических
тестах,
главным
образом,
иммуноферментном анализе. Антигенным компонентом таких тестов служит
комбинация белков, или их фрагментов, кодируемых ОРС2 и ОРСЗ, которые,
как считают, располагаются на поверхности вириона ВГЕ. Несмотря на
отдельные сомнения в отношении специфичности выявляемых таким
способом антител, данные методы нашли широкое применение в
диагностической практике.
Do'stlaringiz bilan baham: |