Bioorganik kimyo

Jixozlar va reaktivlar. 100 ml o’lchagich silindir, stakan, setrifuga (vakuom-filtrlagich qurilmasi),SF-26, ammoniy sulfat, bir dona tovuq tuxumi, dializ uchun kamera(2 l).

Ishning borishi. Tuxum oqsili sarig’idan ajratiladi va o’lchagich silindrga solinadi, so’ngra uning hajmi suv bilan 50 ml gacha etkaziladi va 15,65 g ammoniy sulfat qo’shiladi (asta-sekin aralashtirilib).Hamma tuz bo’laklari erigandan so’ng yarim to’yingan tuz eritmasidan tushgan globulinlar cho’kmasi sentrifuga qilinib (3-5 ming ayl/min) yoki qalin filtr qog’oz orqali filtrlab ajratiladi. Filtrat (ustidagi suyuqlik) o’lchagich silindrga yig’iladi, hajmi o’lchanib, tuz erishi qulay bo’lishi uchun stakanga o’tkaziladi va eritmaga ammoniy sulfat tuzining to’yinishi darajasi 70%gacha etkaziladi.Tuzning miqdori formula yordakmida hisoblanadi:

bu erda:

X – burilgan to’yinish darajasi uchun olingan tuzning miqdori, grammda;

V - oqsil eritmasining hajmi, ml da;

C₁ – tuzning dastlabki to’yinish darajasi (o’nli bo’laklarda 100% = 100)

C₂ – berilgan to’yinishdarajasi.

Kerakli miqdordagi ammoniy sulfat erigandan so’ng loyqalang anaralashma cho’kma xosil qilish uchun 30 – 40 min qoldiriladi (tindiriladi).Ovalbumin cho’kmasi globulinlar kabi yig’ib olinadi. Cho’kma (agarda filtrlash ishlatilgan bo’lsa – filtr qog’oz cho’kma bilan birga holda) oz hajmdagi suvda suspenziyalanib, dializ qopchasiga solinadi va tuzni chiqarib yuborish uchun dializ qilinadi. Buning uchun dializ qopchasi iliq suv bilan ho’llanib bir uchi bog’lanadiva voronka yordamida oqsil eritmasi bilan to’ldiriladi.Dializ 4 marta 20 mmol pH 7,4 bo’lgan natriy fosfat bufer eritmasida, har galgi almashish 1soatdan kam bo’lmagan holda olib boriladi.

Dializning dastlabki 2 soatini suv bilan olib borish mumkin. Dializatdagi ovalbuminning konsentratsiyasi 260 va 280 nm da yutilishi bo’yicha aniqlanib, nonogrammaga asosan (47 b.) bitta tuxumdagi oqsil miqdori hisoblanadi.