Азотнинг табиатда айланиши

DNK va nukleotidlarni

barqarorlashtiradi.

• 
  500 mM KCl
  
• 
  100 mM Tris-HCl, pH 8.3
  
• 
  Triton X-100 or Tween
  

DNK nusxalari – ko’paytirilish kerak bo’lgan hududni o’z ichiga oladi. DNK nusxalari ko'pincha genom DNK si (gDNK), cDNK (cDNK) yoki klonlangan DNK fragmentini o'z ichiga olgan plazmidalardan iborat bo’ladi.

PZR da DNK miqdori muhim hisoblanadi.

Praymerlar

• 
  Aplifikatsiya qilinadigan uchastkaga spetsifik bo’ladi;
  
• 
  Forward va Reverse praymerlar;
  
• 
  Suyuqlanish harorati ma’lum bo’ladi (bu praymer tarkibidagi GC tarkibiga bog’liq);
  
• 
  Uzunligi 18-25 nukleotid;
  
• 
  Konsentratsiyasi 0.1 – 1.0 uM (pMol/ul);
  
• 
  Suyuqlanish harorati 60-70 C oralig’ida bo’lishi kerak;
  
• 
  Praymerlar bir biriga komplementar bo’lmasligi kerak;
  

DNK anplifikatorlar

• 
  Nukleotidlar – qurulish materiali hisoblanadi.
  
  • 
    dATP, dGTP, dCTP, dTTP
    
  • 
    20-200 uM konsentratsiyada foydalaniladi;
    
• 
  Mg++ ionlari
  
  • 
    DNK polimerazaning kofaktori;
    
  • 
    DNK polimerazani faollashtiradi;
    
  • 
    DNK ni stabillaydi;
    
  • 
    0.5 - 3.5 uM miqdorda foydalaniladi;
    
• 
  DNA Polimeraza
  
  • 
    TAQ polimeraza yoki shunga o’xshagan polimerazalardan foydalaniladi; Yuqori haroratga chidamli;
    
• 
  Thermus aquaticus (Taq-polimeraza), Pyrococcus furiosus (Pfu-polimeraza), Pyrococcus woesei (Pwo-polimeraza)
  

104. ПЗР реакцияси босқичлари.

105. ПЗР учун праймерлар.

• 
  Praymerlar
  
  • 
    Aplifikatsiya qilinadigan uchastkaga spetsifik bo’ladi;
    
  • 
    Forward va Reverse praymerlar;
    
  • 
    Suyuqlanish harorati ma’lum bo’ladi (bu praymer tarkibidagi GC tarkibiga bog’liq);
    
  • 
    Uzunligi 18-25 nukleotid;
    
  • 
    Konsentratsiyasi 0.1 – 1.0 uM (pMol/ul);
    
  • 
    Suyuqlanish harorati 60-70 C oralig’ida bo’lishi kerak;
    
  • 
    Praymerlar bir biriga komplementar bo’lmasligi kerak;