Аминокислот в белках, пептидах и лекарственных препаратах

Исходные растворы. Готовят как указано в Методе 8. 
Раствор для карбоксиметилирования. Готовят раствор 100 г/л 
йодацетамида в 96 % спирте. 
Буферный 
раствор. 
Используют 
восстанавливающий 
раствор, 
приготовленный как указано в Методе 8. 
Методика. Испытуемый образец растворяют в 50 мкл буферного раствора 
и прибавляют около 2,5 мкл исходного раствора С. Выдерживают при комнатной 
температуре в защищенном от света месте в атмосфере азота или аргона в 
течение 2 ч. Прибавляют раствор для карбоксиметилирования в 1,5-кратном 
количестве от общего теоретического содержания тиолов, и выдерживают 
дополнительно в течение 30 мин при комнатной температуре в защищенном от 
света месте. Если содержание тиолов в белке неизвестно, прибавляют 5 мкл 0,1 
М раствора йодацетамида на каждые 20 нмоль испытуемого образца белка. Для 
прекращения реакции прибавляют избыток 2-меркаптоэтанола. Обессоливают 
белок/пептид методом обращенно-фазовой ВЭЖХ, собирая белковую/пептидную 
фракцию. Перед кислотным гидролизом собранный образец может быть высушен 
при помощи вакуумного центрифугирования. В процессе кислотного гидролиза 
полученный 
S-
карбоксиамидометилцистеин 
будет 
превращаться 
в 
S-
карбоксиметилцистеин. 
МЕТОД 10 
Цистеин/цистин, прореагировавший с дитиогликолевой кислотой или 
дитиодипропионовой кислотой, образует смешанный дисульфид. Выбор 
дитиогликолевой кислоты или дитиодипропионовой кислоты зависит от 
требуемого разрешения методики аминокислотного анализа. 
Восстанавливающий раствор. Раствор 10 г/л дитиогликолевой кислоты 
(или дитиодипропионовой кислоты) в 0,2 М растворе натрия гидроксида. 

---

Методика. Около 20 мкг испытуемого образца помещают в ампулу для 
гидролиза и прибавляют 5 мкл восстанавливающего раствора. Прибавляют 10 мкл 
изопропилового спирта и удаляют всю жидкость из образца при помощи 
вакуумного центрифугирования. Образец гидролизуют, используя метод 1. 
Преимущество данного метода заключается в том, что остатки других 
аминокислот не участвуют в побочных реакциях, а образец не нуждается в 
обессоливании перед гидролизом. 
МЕТОД 11 
Аспарагин и глутамин в процессе кислотного гидролиза превращаются в 
аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту, соответственно. Остатки 
аспарагина и аспарагиновой кислоты обозначают как Asx, а остатки глутамина и 
глутаминовой 
кислоты 
обозначают 
как 
Glx
. 
Белки/пептиды 
могут 
взаимодействовать с бис(1,1-трифторацетокси)йодбензолом (БТЙ), превращая 
при гидролизе остатки аспарагина и глутамина в остатки диаминопропионовой 
кислоты и диаминомасляной кислоты, соответственно. Эти превращения 
позволяют определять в белке/пептиде содержание аспарагина и глутамина в 
присутствии остатков аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты.