Darsning maqsadi: Dezoksiribonuklein kislotalarni poliakrilamid gelida

---

 
Darsning maqsadi: 
Dezoksiribonuklein kislotalarni poliakrilamid gelida 
elektroforez qilish yo’li bilan fraksiyalash 
Reaktivlar va materiallar:
DNK elektroforezi uchun quyidagi asbob va reaktivlar 
bizga zarur bo’ladi; spektrofotometr, mikrofotometr (MF-4), elektroforez asbobi, 
20-50 ml li shisha shpris, o’lchov kolbalari (100; 1000 ml li), ichki diametri 5-6 mm, 
uzunligi 7-8 sm li shisha naychalar, pipetkalar (0,1; 0,1 va ml li), pH-metr, 
sianogum-41 yoki akrilamid va N1N1-metilen bisakrilamid, TEMED - tetrametil 
etilendiamin, ammoniy persulfatning 10% li eritmasi, saxarozaning 40% li eritmasi, 
bromfenol ko’kining 0,25% li eritmasi, tris asetat buferi (pH 7,8), perxlorat 
kislotaning 0,5 N eritmasi, sirka kislotaning 1 M eritmasi, metilen ko’kining (0,4 M) 
asetat buferidagi (pH 4,7) 0,2% li eritmasi.
Ishni bajarish tartibi.
Nuklein kislotalarni fraksiyalash uchun ko’pincha saxaroza 
zichlik gradientida ultrasentrifugalash, xromatografik, elektroforetik usullar ko’p 
qo’llaniladi. Bu usullar ichida poliakrilamid gelidagi elektroforez usuli diqqatga 
sazovor. Bu usulning afzalligi shundaki, birinchidan, sintetik gel g’ovaklarining 
o’lchamlarini boshqarish mumkin, ikkinchidan, birdaniga bir vaqtning o’zida 
tekshirilayotgan aralashmani ko’p miqdorda fraksiyalash mumkin. Tarkibida 2,4% 
akrilamid bo’lgan poliakrilamid gelidagi elektroforez umumiy DNK ni molekulyar 
massasiga qarab turli fraksiyalarga ajratishga imkon beradi. 
Gel tayyorlash.
 
Gel tayyorlash uchun 95% li akrilamid va 5% li N1N1- 
Metilenbisakrilamid aralashmasidan iborat bo’lgan sianogum-41 preparati 
ishlatiladi. Biror ob’ektdan ajratib olingan umumiy DNK ni fraksiyalash 2,4% li 
13-LABORATORIYA MASHG’ULOTI