МИКРОВЕЗИКУЛЫ МОНОЦИТОПОДОБНЫХ КЛЕТОК
ЛИНИИ THP-1 И ИХ БЕЛКОВЫЙ ПРОФИЛЬ
Березкина М.Э., студ., Александрова Е.П., студ.,
Маркова К.Л., м.н.с.
Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии
и репродуктологии им. Д.О. Отта,
Санкт-Петербург, Россия
Научный руководитель: Кореневский А.В., д.б.н.
Моноциты/макрофаги являются важнейшими компонентами
врожденного иммунитета — они участвуют в удалении погибших
клеток и чужеродных патогенов. Свои функции моноциты/ма-
крофаги осуществляют путем непосредственного взаимодействия
с мишенями либо дистантно, посредством продукции цитокинов
и хемокинов, а также микровезикул (МВ). МВ представляют собой
новый малоизученный субъект коммуникации, содержащий в сво-
ем составе белки, липиды, микроРНК и другие соединения. Для по-
нимания функций МВ, продуцируемых моноцитами/макрофагами,
необходимо изучение их внутреннего белкового состава.
Целью
данного исследования является идентификация и кла-
стерная характеристика белков моноцитоподобных клеток линии
THP-1.
Клетки линии THP-1 культивировали в полной ростовой среде
в соответствии с рекомендациями производителя. Для отделения
клеток от продуцируемых ими МВ культуру подвергали дифферен-
циальному центрифугированию. Белки клеток и МВ фракциониро-
вали в системе SDS-PAGE, масс-спектры триптических пептидов по-
лучали на MALDI-TOF-масс-спектрометре. Идентификацию белков
осуществляли относительно открытых баз данных SwissProt/UniProt
и NCBI помощи программы Mascot. Функции белков и их локализа-
цию в клетке также определяли по базе данных GeneGO алгоритма-
ми биоинформатического ресурса DAVID 6.8.
В результате масс-спектрометрического анализа лизатов клеток
линии THP-1 и продуцируемых ими МВ было идентифицировано
107 белков, выполняющих различные функции. Все белки были рас-
ИММУНОЛОГИЯ, АЛЛЕРГОЛОГИЯ, АУТОИММУНОЛОГИЯ
153
пределены в группы на основе их молекулярных функций, участия
в биологических процессах и локализации в клетке. В исследуемых
МВ были обнаружены белки цитоскелета, структурные и моторные
белки, ферменты, белки-регуляторы клеточной адгезии, рецепто-
ры. Были идентифицированы такие белки, как белки-регуляторы
биосинтеза белка и белки убиквитин-протеасомной системы де-
градации белков. Нам, кроме того, удалось обнаружить некоторые
специфические белки, в частности отвечающие за реализацию меха-
низмов защиты, белки иммунного ответа и воспаления, цитокины и
факторы роста, а также рецепторы к ним.
Получены данные о протеоме моноцитоподобных клеток линии
THP-1 и продуцируемых ими МВ. С помощью биоинформатических
ресурсов идентифицированные белки объединены в группы на ос-
нове выполняемых функций, а также локализации в клетке. Полу-
ченные данные расширяют представления об участии моноцитов/
макрофагов в развитии иммунного ответа.
Авторы выражают благодарность научному руководителю, д.б.н.,
А.В. Кореневскому.
154
ИММУНОЛОГИЯ, АЛЛЕРГОЛОГИЯ, АУТОИММУНОЛОГИЯ
Do'stlaringiz bilan baham: |