Xxiv международная медико-биологическая конференция молодых исследователей Фундаментальная наука и клиническая

СЕМАФОРИН 3А ИНГИБИРУЕТ 
ПРОЛИФЕРАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ 
КЛЕТОК ТИМУСА
Рутто К.В., н.с., Киселева Е.П., в.н.с.
Институт экспериментальной медицины,
Санкт-Петербург, Россия
Научный руководитель: Кудрявцев И.В., к.б.н., зав. лаб.
Одним из этапов при созревании и дифференцировки тимоци-
тов является пролиферация созревающих клеток. Семафорин 3А 
(Sema 3A) синтезируется внутри тимуса и клетками перифериче-
ской иммунной системы. Известно, что Sema 3A ингибирует анти-
CD3/анти-CD28 — индуцированную пролиферацию Т-лимфоцитов 
и аллогенную пролиферацию Т-клеток при их совместном культи-
вировании с дендритными клетками. Однако влияние Sema 3A на 
пролиферацию клеток тимуса не изучалось. 
Цель работы
заключалась в изучении действия Sema 3А на про-
лиферативную активность тимоцитов и эпителиальных клеток ти-
муса мыши. 
В работе использовали линии клеток кортикального cTEC1-2
и медуллярного mTEC3-10 эпителия тимуса мыши и тимоциты, 
полученные из тимуса мышей (самцов) гибридов F1. Спонтанную 
пролиферацию (72 ч) тимоцитов изучали с помощью МТТ-теста, 
параллельно с которым производили визуальный подсчет жизнеспо-
собных клеток. Апоптоз (24 ч) тимоцитов исследовали с помощью 
проточной цитометрии путем окрашивания ДНК-свзывающими 
красителями: YO-PRO-1 и DAPI. Пролиферацию (72 ч) клеток 
эпителия исследовали путём добавления тетразолиевого реагента 
WST-1 или окрашивания 0,05% метиленовым синим. Проведение 
перечисленных методов сопровождали количественным подсчётом 
концентрации жизнеспособных клеток. Статистическую обработку 
полученных данных проводили с помощью t-критерия Стьюдента.
Впервые показано, что Sema 3A (100 нг/мл) ингибировал спон-
танную пролиферацию тимоцитов мыши. Для проверки, не связан 
ли подавляющий эффект Sema 3A с индукцией апоптоза в тимо-

---

ИММУНОЛОГИЯ, АЛЛЕРГОЛОГИЯ, АУТОИММУНОЛОГИЯ
147
цитах определяли относительное содержание клеток, находящихся
в стадии раннего или позднего апоптоза/некроза. Исследование про-
водили в двух вариантах — без стимулятора (спонтанный) и в при-
сутствии стандартного индуктора апоптоза — камптотецина. Ни
в том, ни в другом случае Sema 3A (100 нг/мл) не вызывал увеличе-
ния относительного содержания тимоцитов, находящихся в состоя-
нии раннего или позднего апоптоза/некроза.
Впервые показано, что Sema 3A (100 нг/мл) ингибировал проли-
ферацию клеток cTEC1-2 и mTEC3-10. При этом жизнеспособность 
клеток, оцениваемая с помощью окрашивания трипановым синим, 
составляла не менее 95%.
В данной работе впервые показано, что Sema 3A ингибирует про-
лиферацию тимоцитов и эпителиальных клеток тимуса мыши. По-
давляющее действие Sema 3A на пролиферацию тимоцитов не свя-
зано с индукцией апоптоза в этих клетках. Таким образом, можно 
предположить, что Sema 3A способен оказывать существенное вли-
яние на процесс созревания тимоцитов. 

---

148
ИММУНОЛОГИЯ, АЛЛЕРГОЛОГИЯ, АУТОИММУНОЛОГИЯ