МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ПРОЛИФЕРАЦИИ
КЛЕТОК ЛИНИИ JURKAT И ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ
КЛЕТОК ПАМЯТИ ПЕРВИЧНЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ
ЧЕЛОВЕКА ПОД ВЛИЯНИЕМ СТРЕПТОКОККОВОЙ
АРГИНИНДЕИМИНАЗЫ
Ожиганова А.И., студ., Маммедова Д.Т., м.н.с.
Институт экспериментальной медицины,
Санкт-Петербург, Россия
Научный руководитель: Старикова Э.А., с.н.с.
Введение.
Бактериальная аргининдеиминаза (АДИ) гидролизует
аргинин. Дефицит аргинина может приводить к ингибиции сигналь-
ных путей, таких как mTOR, регулирующего пролиферацию, ауто-
фагию и метаболизм клеток.
Цель.
Изучить влияние стрептококковой АДИ на пролиферацию,
дифференцировку, процессы аутофагии и мембранный потенциал
митохондрий Т-клеток.
Материалы и методы.
Работу проводили на клетках линии
Jurkat и мононуклеарных лейкоцитах периферической крови чело-
века (PBMCs). Клетки культивировали с супернатантами разрушен-
ных стрептококков (СРС) S.pyogenes штамма М49-16 и его мутан-
та с инактивированным геном АДИ М49-16delArcA. Стимуляцию
PBMCs проводили с помощью антител к CD2, CD3, CD28. Интен-
сивность пролиферации Jurkat оценивали в МТТ-тесте. Для оцен-
ки процессов аутофагии и мембранного потенциала митохондрий
(МПМ) Jurkat и PBMCs окрашивали Lysotracker Green DND-26 либо
DIOC6 (3) соответственно. PBMCs дополнительно окрашивали
антителами, конъюгированными с флуорохромами: CD45RA-PC7,
CD3-APC-Alexa-750, CD-62L-ECD, CD4-APC — для выделения по-
пуляций Т-хелперов (Th) и цитотоксических клеток (CTL), а также
популяции клеток памяти: наивные, центральная память (СМ), эф-
фекторная память (ЕМ), терминально дифференцированные эф-
фекторы (TEMRA). Пробы анализировали на проточном цитометре.
Результаты.
Было установлено, что СРС М49-16 подавляет про-
лиферацию Jurkat, увеличивает интенсивность аутофагии и МПМ.
ИММУНОЛОГИЯ, АЛЛЕРГОЛОГИЯ, АУТОИММУНОЛОГИЯ
169
СРС мутантного штамма слабо подавлял пролиферацию, на осталь-
ные параметры не оказывал влияния. Добавка 2мМ аргинина ниве-
лировала влияние СРС М49-16.
После 4-х суток инкубации было выявлено, что в популяциях
Th и CTL CРС М49-16 подавлял дифференцировку наивных кле-
ток в СМ и увеличивал долю TEMRA в стимулированных клетках.
В контроле при стимуляции клеток происходило повышение ин-
тенсивности аутофагии во всех популяциях и МПМ в популяциях
наивных и СМ. В популяции Th СРС М49-16 препятствовал повы-
шению аутофагии во всех популяциях, кроме TEMRA, на МПМ не
влиял достоверно. В популяции CTL при стимуляции СРС М49-
16 увеличивал интенсивность аутофагии в наивных клетках и СМ
в сравнении с нестимулированными клетками, но она не достигала
уровня контроля при стимуляции. СРС М49-16delArcA не влиял на
исследуемые параметры. Добавка аргинина нивелировала различия
с контролем при стимуляции.
Выводы.
Стрептококковая АДИ вызывает дефицит аргинина
в Т-клетках, что изменяет метаболический профиль клеток, пода-
вляет пролиферацию и дифференцировку в клетки памяти
170
ИММУНОЛОГИЯ, АЛЛЕРГОЛОГИЯ, АУТОИММУНОЛОГИЯ
Do'stlaringiz bilan baham: |