Феномен преципитации – эффект укрупнения растворимых антигенных субстанций под влиянием антител с возникновением помутнения прозрачных растворов. В этом случае мы сталкиваемся с явлением агрегации растворенных частиц. Следует заметить, что нерастворимый комплекс антиген – антитело выпадает только в определенном диапазоне эквивалентных концентраций реагирующих молекул. В случае большого избытка антител или антигена феномен преципитации не развивается. Это не значит, однако, что взаимодействия реагентов не произошло; оно произошло, но образовался растворимый комплекс антиген – антитело.
Цель работы:Ознакомление с принципами иммунологической специфичности и освоение иммунологических реакций, основанных на феноменах агглютинации и преципитации.
Ход работы Реакции, основанные на феномене агглютинации Агглютинация представляет собой склеивание клеток или отдельных частичек (носителей антигена) друг с другом. В соответствии с этим агглютинирующий эффект иммунной сыворотки может быть выявлен только в том случае, если в реакции используется корпускулярный антиген. При использовании растворимого антигена его необходимо предварительно адсорбировать на инертных носителях.
Реакция агглютинации применяется в двух вариантах:
метод на плоскости, который позволяет дать быстрый ответ о наличии или отсутствии антител;
пробирочный метод, который обычно используют для количественного изучения концентрации антител в сыворотке.
Метод на плоскости. На предварительно тщательно вымытую и обезжиренную поверхность предметного стекла наносят 1 каплю сыворотки и 1 каплю взвеси исследуемой культуры клеток в физиологическом растворе (концентрация культуры клеток предварительно подбирается по стандартам мутности). Сыворотку и культуру перемешивают стеклянной палочкой. При покачивании предметного стекла наблюдают появление агглютината, собирающегося в центре. При этом отдельные клетки культуры склеиваются в комочки, т.е. соединяются в более крупные конгломераты, хорошо заметные на фоне прозрачной сыворотки. Агглютинация может наступить быстро, но иногда ее появление отмечается лишь спустя 10÷15 мин. Отрицательный результат фиксируют, если клетки исследуемой культуры остаются равномерно распределенными в смеси и последняя выглядит равномерно мутной.
В качестве контроля на предметное стекло наносят 1 каплю физиологического раствора и 1 каплю исследуемой культуры клеток. Физиологический раствор и культуру перемешивают стеклянной палочкой. В контроле должно наблюдаться отсутствие агглютинации. Контроль ставится для того, чтобы проверить отсутствие спонтанной агглютинации культуры клеток в физиологическом растворе.