Валидационная оценка методов качественного и количественного анализа ингредиентов лекарственного средства

Хi	Хi-Хср	(Хi-Хср)^2	SD
RSD,%
1	0,0205	-0,000788889	6,22346E-07	0,002329401	10,94186484
2	0,0194	-0,001888889	3,5679E-06
3	0,0185	-0,002788889	7,7779E-06
4	0,02	-0,001288889	1,66123E-06
5	0,021	-0,000288889	8,34568E-08
6	0,0195	-0,001788889	3,20012E-06
7	0,0239	0,002611111	6,8179E-06
8	0,024	0,002711111	7,35012E-06
9	0,0248	0,003511111	1,23279E-05
Хср	0,021288889	Σ(Хi-Хср)^2	4,34089E-05

В фармацевтическом анализе для нормирования значений прецизионности наиболее оптимальным можно считать рекомендации американской ассоциации аналитической химии, в которой приводится данные оценки сходимости (воспроизводимости), как функции аналитической концентраций, которые приведены в таблице 4.
Таблица 4.Данные оценки воспроизводимости.

Содержание анализируемого компонента в образце, %	Относительное стандартное отклонение (RSD)
100	1,3
10	2,8
1	2,7
0,1	3,7
0,01	5,3
0,001	7,3
0,0001	11,0
0,00001	15,0
0,000001	21,0
0,0000001	30,0

Заключение: Так как рассчитанное значение RSD не больше приведённого в таблице, методика соответствует требованиям валидации по показателю прецизионность.
Примечания:

1. 
   Прецизионность зависит только от случайных погрешностей и не имеет отношения к истинному или установленному значению измеряемой величины.
   
2. 
   Меру прецизионности обычно выражают в терминах неточности и вычисляют как стандартное отклонение результатов измерений. Меньшая прецизионность соответствует большему стандартному отклонению.
   

«Независимые результаты измерений (или испытаний)» - результаты, полученные способом, на который не оказывает влияния никакой предшествующий результат, полученный при испытаниях того же самого или подобного объекта. Количественные значения мер прецизионности существенно зависят от регламентированных условий. Крайними случаями совокупностей таких условий являются условия повторяемости и условия воспроизводимости.

§2.4.Определение правильности

Правильностью аналитической методики называется степень близости экспериментальных результатов к истинному значению во всей области измерений. Главным фактором, определяющимправильность, является значение систематической погрешности.
Для оценки правильности методик количественного определения активной субстанции применимы следующие подходы:
a) применение аналитической методики к образцу с известной степенью чистоты, например к стандартному образцу;
b) сравнение результатов анализа, полученных с использованием валидируемой методики и арбитражного метода, правильность и прецизионность которого известны;
c) заключение о правильности можно сделать после того, как установлены прецизионность, линейность и специфичность.
Для оценки правильности методик количественного определения готового лекарственного препарата:
a) применение методики к искусственным (модельным) смесям, к которым были добавлены известные количества анализируемого вещества;
b) если невозможно получить образцы всех компонентов лекарственного препарата, возможно применение метода добавок или арбитражной методики, правильность которой доказана
c) заключение о правильности можно сделать после того, как установлены прецизионность, линейность и специфичность.
Далее приведен первый способ определения правильности с использованием модельной смеси.
Для тестирования методики на правильность готовятся модельные смеси с точным содержанием каждого из компонентов, включая и вспомогательные вещества. Согласно рекомендациям ICH необходимо проанализировать не менее 9 образцов на 3 уровнях концентраций. Правильность методики устанавливается в указанном диапазоне ее применения. Для оценки полученных результатов наиболее простым и наглядным критерием служит открываемость (R), которая вычисляется по формуле:

При проведении анализа будут получены 9 значений открываемости.
Для более детальной оценки следует статистически обработать полученные значения R, рассчитав стандартное и относительное стандартное отклонение. Это наиболее простой способ (способ А).
Например, валидационной оценке была подвергнута методика количественного определения метронидазола в инфузионном растворе методом непосредственной спектрофотометрии. Полученные результаты установления точности представлены в таблице
Для анализа необходимо приготовить 3 модельных раствора рибофлавина калия йодидом.
Исследуемый раствор.
РастворА1: Точные навески рибофлавина(0,03) и каля йодида(4,5) помещают в мерную колбу вместимостью 250мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.
РастворА2: Точные навески рибофлавина (0,05) и калия йодида(7,5)помещают в мерную колбу вместимостью 250мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.
РастворА3: Точные навески рибофлавина (0,07) и каля йодида(0,5)помещают в мерную колбу вместимостью 250мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.
Затем из них готовят следующие разведения:
Раствор Б1, Б2, Б3. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 5мл А1 и доводят водой до метки.
Раствор Б4, Б5, Б6. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 7мл А2 и доводят водой до метки.
Раствор Б7, Б8, Б9. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 9мл А3 и доводят водой до метки.
Измеряют оптическую плотность каждого из 9 приготовленных растворов на спектрофотометре при длине волны 445нм в кювете с толщиной слоя 10мм.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора СО 0,001% раствора рибофлавина.
Расчёт содержания рибофлавина в процентах рассчитывают по формуле
где,
X1 =0,0132
X2 =0,0336
X3 =0,0334
X4 =0,0517
X5 =0,0514
X6 =0,0541
X7 =0,0756
X8 =0,0768
X9 =0,0773
R=
Таблица 5.

№	Уровень	Взято	Найдено	R%
		г/250мл	г/250мл
1	1	0,03	0,033	110
2	1	0,03	0,0336	112
3	1	0,03	0,0334	111
4	2	0,05	0,0517	103,4
5	2	0,05	0,0514	102,8
6	2	0,05	0,0541	108,2
7	3	0,07	0,0765	109,2
8	3	0,07	0,0768	109,7
				Rcр=108,52

Таблица 6.

№п/п	Х,%	Хi-Хср	(Хi-Хср)^2	SD	RSD,%
1	110	1,477777778	2,18382716	3,257214215	3,00142602
2	112	3,477777778	12,09493827
3	111	2,477777778	6,139382716
4	103,4	-5,122222222	26,23716049
5	102,8	-5,722222222	32,74382716
6	108,2	-0,322222222	0,10382716
7	109,2	0,677777778	0,459382716
8	109,7	1,177777778	1,387160494
9	110,4	1,877777778	3,526049383
Хср	108,5222222	Σ(Хi-Хср)^2	84,87555556

Таблица 7.Оценка открываемости в зависимости от концентрации активного компонента в анализируемом образце.

Содержание аналита в образце, %	Открываемость, %
100	98-102
≥10	98-102
≥1	97-103
≥0,1	95-105
0,01	90-107
0,001	80-110
0,0001	80-110
0,00001	60-115
0,000001	40-120

Рассчитываем стандартное и относительное отклонение.
Рассчитанное значение RSD не больше, приведённого в таблице 7, методика соответствует требованиям валидации по показателю правильность.
Заключение: полученные результаты показывают, что методика соответствует требованиям валидации.
Вывод:
В процессе выполненной работы ознакомились с такими показателями, как специфичность, прецизионность, линейность, правильность.
В результате анализа ЛС, содержащего 0,002г рибофлавина и 10 мл 3% раствора калия йодида, было выявлено, что метод фотоколориметрического определения содержания вещества является специфичным для компонента 1( рибофлавина);
Данные метода титриметрического и фотоколориметрического анализов являются прецизионными;
Методики титриметрического и фотоколориметрического определения ингредиентов ЛС являются линейными и соответствуют требованиям НД по показателю правильность.
Список литературы.
1. Беликов , В.Г Фармацевтическая химия: Учеб. для вузов- Пятигорск, 2003. -641С.
2. Машковский, М.Д. Лекарственные средства : 15-е издание, перераб., испр. и доп.- М.: Новая волна 2007.-613с.:ил.
3. Лабораторные работы по фармацевтической химии: уч. пособие/ В.Г. Беликов и др./-2-е издание, перераб. и доп. Пятигорск, 2003-200с.
4. Валидационная оценка методик спектрофотометрического анализа рибофлавина. Уч. пособие.