Валидационная оценка методов качественного и количественного анализа ингредиентов лекарственного средства

Определение специфичности в тестах «Количественное определение» рибофлавина.
Для количественного анализа рибофлавина применяют метод спектрофотометрии в УФ области. Все испытания выполняют, защищая испытуемое лекарственное вещество от попадания прямого солнечного света. В водных растворах рибофлавин имеет 4 максимума поглощения при длинах волн 223, 267, 370 и 445. На практике же достаточно лишь одного максимума поглощения при длине волны 445нм, используя в качестве растворителя дистиллированную воду. Для установления специфичности методики требуется проанализировать модельные смеси № 1 и №3 в указанных условиях:
К 0,5мл каждой из модельных смесей приливают 9,5 мл воды и измеряют оптическую плотность(Ax) полученного раствора при длине волны около 445 нм. Толщина слоя раствора в кювете – 10 мм, раствор сравнения – вода.
В конечном результате анализируемый лекарственный препарат имеет максимум поглощения при длине волны 445нм.
Заключение: таким образом ,полученные результаты соответствует требованию валидации по показателю специфичность качественного и количественного анализа, т.к. модельная смесь №1 имеет максимум поглощения при длине волны 445нм, а модельная смесь №3 – не имеет.

§2.2.Определение линейности

Линейность методики – это наличие прямой пропорциональной зависимости оптической плотности от концентрации или количества определяемого вещества в анализируемой пробе.
Линейность выражается уравнением у = ax + b. Это уравнение называют линейной регрессией. Параметр bградуировочной функции характеризует отрезок, отсекаемый на оси ординат и соответствующий значению холостого опыта, а коэффициент aхарактеризует наклон градуировочной кривой и является отражением чувствительности методики
Для проверки линейности следует брать не менее 5 экспериментальных точек. При этом наиболее правильно использовать отдельные навески и затем готовить из них растворы соответствующих концентраций.
На характер градуировочного графика и на линейность в значительной степени могут оказывать влияние условия выполнения анализа: количество реактивов, концентрации анализируемых растворов и др.
Таблица 1. Зависимость оптический плотности от концентрации.

Концентрация полученного раствора, %	0.0004	0.0012	0.002	0.0028	0.0036
Оптическая плотность	0.108	0.218	0.331	0.443	0.543

Полученные данные следует представлять в виде градуировочного графика с линией тренда, уравнения графика и величины коэффициента корреляции.

Основной характеристикой линейности является коэффициент корреляции, мера взаимосвязи изменяемых явлений (взаимосвязь).
Коэффициент корреляции составил 0,999772
Формулы и расчеты коэффициентов градуированного графика:


Таблица 2.Результаты определения оптической плотности и концентрации. Расчёты.

Хi	уi	xi×уi	Х²	У²
0,0004	0,108	0,000043	0,00000016	0,0116
0,0012	0,218	0,00023	0,00000144	0,0475
0,002	0,331	0,00066	0,000004	0,1095
0,0028	0,443	0,00124	0,0000078	0,19624
0,0036	0,543	0,00195	0,000001296	0,294484
∑=0,01	∑=1,553	∑=0,004123	∑=0,000014696	∑=0,659324

x- концентрация;y – аналитический сигнал ( оптическая плотность);
Заключение.
Для аналитических целей можно использовать только ту методику для которой зависимость функций от аргумента коррелируется с коэффициентом r,который должен быть ≥0,99.
Таким образом, полученные результаты находятся в пределах допустимых отклонений, т.к. валидация по показателю линейность может варьировать в незначительных пределах.