Universum: технические науки

Исследования острой токсичности экстрактов 
и плодов V.sativa, и V.villosa. 
Острая токсичность определялась путем скарм-
ливания измельченных плодов растений белым 
мышам из расчета 10 г/кг[3]. Плоды в смеси с хлебом 
вводились в течение четырех дней по 50 г (корма) на 
группу. В группах – по 5 мышей обоего пола. Мыши 
контрольной группы – средняя масса 21.0 г;
первая группа (
V.sativa
) – 21.6 г; вторая группа 
(
V.villosa
) – 20.4 г.

---

№ 10 (91)
октябрь, 2021 г. 
8 
Через 4 дня введения препарата контрольная груп-
па набрала в массе 1.9 г – 9%; I группа – 4.1 г (19%), 
II группа – 6 г (29%). Мыши обоих групп имели 
опрятный вид и по двигательной активности не от-
личались от мышей контрольной группы.
В процессе исследований ежедневно проводи-
лись наблюдения общего состояния; поведение, 
употребление воды и корма, состояние шерстяного 
покрова, выделения кала и мочи и т.п.
Ограничений в двигательной активности в течение 
приема корма, а также признаков интоксикации и 
гибели подопытных мышей не наблюдали.
Таблица 2. 
Сравнительная оценка V. sativa и V.villosaс контрольной группой на изменение массы тела мышей 
Группы 
Исходная масса 
(средн.) 
Масса средняя 
через 4 дня 
Разница 
Разница (%) 
Контроль 
21.0 
22.9 
1.9 
9 
I - (
V.sativa
) 
21.6 
25.7 
4.1 
19 
II - (
V.villosa
) 
20.4 
26.4 
6.0 
29 
Результаты изучения измельченных плодов 
V. sativa
и 
V.villosa 
показали, что острого токсического 
действия исследуемых растений выявлено не было. 
Высушенную надземную часть растений измель-
чали в ступке до однородного состояния, отбирали 
навески и экстрагировали в течение часа 0.2н NaOH 
(рН 9.0) в соотношении 1:30 с использованием на 
магнитной мешалки 500 об/мин.
Полученный 
экстракт 
центрифугировали 
на рефрижераторной центрифуге при скорости 
3000 об/мин. в течении 30 мин. Затем в полученном 
надосадочном растворе (супернатанте) проводили 
осаждение суммарного белка путем 60% насыщения 
раствора сухим сульфатом аммония (из расчета 
36.88 г (NH
4
)
2
SO
4
на 100 мл), добавляя его отдель-
ными порциями при перемешивании. Полученную 
белковую суспензию оставляли в холодильнике на 
24 ч для формирования полноценного белкового 
осадка. Затем, суспензию центрифугировали на ре-
фрижераторной центрифуге при 6000 об/мин. в тече-
ние 30 мин. Осадок собирали и растворяли в мини-
мальном объеме (20мл–30мл) 0.2н раствора NaOH [4]. 
Количественное содержание белка в получен-
ном растворе определяли спектрофотометрическим 
методом Калькара, путем измерения оптической 
плотности растворов на спектрофотометре СФ-46 в 
ультрафиолетовом диапазоне при длине волны 260 
и 280 нм [5].
В результате анализа было определено, что в го-
рохе кормовом содержится -4.8% белка, в надземной 
части 
V.sativa
– 6.4%, в 
V.villosa
– 8.8 % и 
V.angustifolia
–
7.2% белка.
Аминокислотный состав выделенных белков 
определяли после диализа полученных белковых 
растворов в проточной воде в течение 24 часов с ис-
пользованием полупроницаемых мембрандля удале-
ния низкомолекулярных компонентов с ММ ниже 
10 000 Да.
Обессоленные белковые растворы лиофильно 
высушивали и отбирали навески белка массой –50 мг.
Гидролиз проводили 5.7 н соляной кислотой при 
110
0
С в течение 24 часов в вакууме.
По окончании реакции гидролизаты упаривали 
и определяли аминокислотный состав на аминокис-
лотном анализаторе марки [6, 7]. Затем гидролизаты 
растворяли в определенном объеме буферного рас-
твора и наносили на хроматографическую колонку 
анализатора. 
Идентификацию и расчет аминокислот провели, 
предварительно проанализировав образцы стан-
дартных растворов аминокислот с известной кон-
центрацией. Содержание аминокислот С (нмоль) 
рассчитывали по площади пика, на основании по-
строения калибровочного графика стандартных 
растворов аминокислот.
Расчет количественного содержания каждой 
аминокислоты (%) проводили по следующей фор-
муле:
С =
С (нмоль) × ММ × 10
−4
m
× 𝑉р
С – концентрация каждой аминокислоты в выде-
ленном белке ( %), 
С (нмоль)–концентрация каждой аминокислоты, 
рассчитанная на основании площади пика амино-
кислоты по графику стандартных растворов амино-
кислот, выраженная в нмолях. 
ММ–молекулярная масса каждой аминокислоты, 
M–навеска белка анализируемого образца, взя-
тая для проведения кислотного гидролиза (мг).
Vр–объём буферного раствора гидролизата при 
нанесении на хроматографическую колонку амино-
кислотного анализатора (0.1–0.5 мл).

---

№ 10 (91)
октябрь, 2021 г. 
9