|
3.3. ИМПРЕГНАЦИЯ СОЛЯМИ МЕТАЛЛОВ
Импрегнация (И., «наполнять», лат.) – это метод выявления некоторых структурных элементов путем пропитывания микрообъектов морфологического исследования растворами солей металлов. Последние способны восстанавливаться в определенных тканевых структурах, благодаря чему происходит их стойкое окрашивание в черный, бурый или другой цвет в зависимости от количества и свойства восстановленного металла.
Данный метод используется как в световой, так и электронной микроскопии. В гистологической практике для импрегнации обычно применяются соли серебра (азотнокислое серебро AgN03), золота (хлористое золото АuС13+2Н20), а также осмиевая кислота. Растворами солей металлов можно обрабатывать как свежие (нефиксированные) объекты, так и полученные из них гистологические срезы. Наиболее важным этапом процесса импрегнации является восстановление соли металла. Оно может происходить в ткани спонтанно без каких-либо дополнительных воздействий. Искусственно стимулировать этот процесс можно с помощью вспомогательных воздействий, при которых процессы восстановления совершаются значительно быстрее и энергичнее (например, свет, подкисление, нагревание). Кроме того, можно использовать восстанавливающие средства (формальдегид, пирогалловую кислоту и т.д.). В ряде случаев после завершения процессов восстановления необходимо удалить остатки соли металла, промывая препараты (срезы) раствором гипосульфита.
Если импрегнации подвергаются только определенные тканевые структуры, а остальные элементы остаются интактными, то изображение называют негативным. А когда, напротив, все элементы тканей импрегнируются и лишь некоторые их части остаются неокрашенными, то это позитивное изображение. Азотнокислое серебро в качестве основного реактива для импрегнации впервые было предложено Реклингаузеном и Гисом (Recklinghausen, His). Оно формирует легко восстанавливаемое соединение с так называемым спайным веществом эпителия и гладких мышц, а также с основным веществом соединительной ткани, придавая этим структурам черный или бурый цвет. Кроме этого, импрегнация широко используется для исследования нервной ткани, поскольку серебро способно откладываться в нервных клетках, осевых цилиндрах, а при определенной обработке и фиксации - в глиальных элементах. Среди многообразия способов наиболее популярен метод Гольджи и его модификации. Левадити (Levaditi) предложил способ импрегнации спирохет в тканях, имеющий в настоящее время много модификаций. Хлористое золото так же как осмиевая кислота, восстанавливается в жирах, поэтому часто применяется для импрегнации тканей, богатых липоидами, особенно миелином, придавая им фиолетовую окраску. Помимо этого, при помощи золота можно выявлять нейрофибрилы нервных клеток, а также тончайшие нервные нити и нервные окончания (роговой оболочки глаза, кожи и др.). Впервые хлористое золото для импрегнации было применено Конгеймом (Cohnheim; 1866), и в настоящее время его способ приобрел множество модификаций - Бастиани, Колосова, Ранвье, и др. Однако, все имеющиеся на сегодняшний день способы импрегнации чрезвычайно капризны, и условия, при которых данных процесс протекает наиболее оптимально, мало изучены. В ряде случаев, помимо изолированного применения золота или серебра, употребляется и комбинированная обработка сразу двумя реагентами. На кафедре патологической анатомии Башкирского медицинского института профессором В.А. Жухиным разработаны оригинальные методики импрегнации элементов ретикулоэндотелиальной системы солями серебра и золота, получившие его имя (методы импрегнации по Жухину) (рис. 37).
По отношению к «окрашиванию» препаратов в электронной микроскопии более распространен термин «контрастирование», поскольку изображение их черно-белое. Для конрастирования в образцы вводят атомы тяжелых металлов: осмия, вольфрама, рутения, урана, свинца.
Структуры, связавшие большее количество этих атомов, сильнее отклоняют электроны и представляются более темными на экране и позитиве и более светлыми на негативе (рис.38). Наиболее распространено контрастирование путем введения контрастных веществ в срезы. Основные трудности, возникающие при контрастировании – низкая специфичность и образование осадков. Специфичность повышается путем подбора оптимальных концентраций веществ, ph, продолжительности обработки.
Do'stlaringiz bilan baham: |
