Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Реактивы и оборудование: 
Препарат слюны, 0,2 М раствор гидроортофосфата натрия, 0,2 М рас-
твор дигидроортофосфата натрия, крахмал (1 %), 1 % раствор йода в 3 % 
растворе йодида калия. Штатив с набором стеклянных пробирок, пипетки 
на 1 и 5 мл, капельные пипетки, термостат. 
Ход работы: А.
 
Пользуясь данными таблицы
 
10,
 
приготовить в шести 
пробирках буферные растворы с различными значениями 
pH. 
Таблица 10. Приготовление фосфатных буферных растворов 
pH 
0,2 М Na
2
HPО
4 
0,2 М NaH
2
PО
4 
pH 
0,2 М Na
2
HPО
4 
0,2 М NaH
2
PО
4 
(мл) 
(мл) 
(мл) 
(мл) 
5,8 
0,40 
4,60 
7,2 
3,60 
1,40 
6,2 
0,92 
4,08 
7,6 
4,35 
0,65 
6,8 
2,45 
2,55 
8,0 
4,73 
0,27 
64 

---

Б.
 
Затем приливают в каждую пробирку по
 
5 мл
 
1 %
 
раствора крахмала
 
и 
по 1 мл раствора слюны, тщательно перемешивают содержимое пробирок. 
Пробирки­ помещают в термостат при 38 °С на 10 минут. После инкубации во 
все пробирки добавляют по 5 капель раствора йода, перемешивают, наблю-
дают окраску и отмечают активность. Для наглядности в каждую пробирку 
можно добавить немного дистиллированной воды и размешать. На основании 
опытных данных делают вывод о pH-оптимуме амилазы слюны. 
Влияние активаторов и ингибиторов на активность амилазы 
Активаторы и ингибиторы влияют на активный центр фермента, способст­ 
вуют образованию его или блокированию. Активаторы и ингибиторы могут 
взаимодействовать­ и с аллостерическим центром фермента и тем самым из-
менять его каталитическую активность. Например, сульфат меди оказывает 
тормозящее действие на активность амилазы, а хлорид натрия является ее ак-
тиватором. О влиянии этих веществ на активность амилазы судят по степени 
гидролиза крахмала под влиянием фермента в присутствии хлорида натрия и 
сульфата меди.