Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

раздела). Химическая денату-рация достигается прежде­ всего с помощью 
соединений, разрывающих водо-родные связи (6–8 М раствор мочевины, 4 М 
раствор гидрохлорида гуанидина), обработкой кислотами и щелочами (3 < рН < 9), 
а также воздействием поверхностно-активных веществ, например 1 % раствором­ 
додецилсульфата 
натрия. 
Чувствительность 
отдельных 
белков 
к 
денатурирующим­ средствам различна. 
Денатурация с разрывом нековалентных связей обычно обратима. Путем 
образования­ новых связей, а также благодаря взаимодействию с денатурирую-
щим веществом­ новая конформация стабилизируется. Возникающее метаста-
бильное состояние при восстановлении физиологических условий может вер-
нуться к нативной конформации, т. е. происходит 
ренатурация
. Способность 
28 

---

к ренатурации экспериментально­ была доказана для трипсина, панкреатиче-
ской рибонуклеазы и др. 
Реактивы и оборудование: 
Сульфат аммония (кристаллический и насыщенный раствор); уксусная 
кислота (1 % и 10 %); гидроксид натрия (10 %); концентрированные кислоты: 
азотная, серная, соляная, уксусная; трихлоруксусная кислота (5 %); сульфоса-
лициловая кислота (20 %); сульфат меди (1 %); ацетат свинца (1 %); нитрат 
серебра (1 %); пикриновая кислота (насыщенный раствор); таннин (10 %); со-
ляная кислота (5 %); 0,2 М уксусная кислота; 0,2 М ацетат натрия; этиловый 
спирт; ацетон; гексацианоферрат (III) калия (5 %); казеин (1 %); яичный белок 
(1 %); солевая вытяжка белка: 10 г измельченной мышечной ткани настаива-ют 
при помешивании в ступке в течение 10–15 минут с 40–50 мл 10 % рас-твора 
хлорида натрия. Образовавшуюся однородную массу фильтруют через двойной 
слой марли. Первые мутные капли фильтрата сливают на фильтр 
и
повторно фильтруют. Фильтрование идет медленно. Получают около 15– 
20 мл прозрачного опалесцирующего розово-красного раствора. В полученной­ 
солевой вытяжке белка содержатся глобулины и альбумины. 
 
Штатив с набором пробирок, стеклянные воронки, стеклянные палоч-ки, 
фильтры бумажные, пипетки на 1 и 2 мл, спиртовки, целлофановые ме-
шочки: вырезают из целлофана круг диаметром 9–12 см. Складывают его 
 
в
форме мешочка­, вставляют в отверстие стеклянную трубку, длиной 5–6 см 
 
и
диаметром­ 0,5–0,8 см, так, чтобы верхний конец трубки выступал из ме-
шочка на 2–3 см, а нижний был погружен внутрь на одну треть мешочка. 
Мешочек туго завязывают на трубке шнурком. До работы диализный 
мешочек следует сохранять наполненным водой и погруженным в воду. 
Перед работой воду выливают и с помощью воронки с оттянутым концом 
вливают в мешочек солевой раствор­ белка (не более половины объема 
мешочка); диализатор (или стеклянный стакан на 0,5 л).