Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Реактивы и оборудование: 
0,1 М растворы аминокислот; бутанол; ледяная уксусная кислота; 1 % 
нингидрин в 95 % ацетоне. Сушильный шкаф, хроматографические камеры 
(цилиндры­), хроматографическая бумага, стеклянные пластинки, пинцеты, 
микропипетки­, простые карандаши, линейки, держалки для сушки хромато-
грамм, ножницы, пульверизаторы. 
Ход работы: 
1. 
 
Вырезают полоску хроматографической бумаги в
 
зависимо­­сти от величины хроматографической камеры, в которой проводят 
хроматографирование­. В качестве хроматографической камеры можно ис-
пользовать большие­ пробирки, цилиндры. Хроматографическую бумагу 
брать только пинцетом, чтобы не оставлять отпечатки пальцев. 
2. На полоске бумаги (3 см × 15 см) наносят простым карандашом линию 
на расстоянии 3 см от края хроматограммы. Делят линию старта на 4 точки и 
обозначают цифрами 1, 2, 3, 4. Конец полоски бумаги «заостряют» со сторо-
ны линии старта, отрезав кусочки бумаги. 
3. Помещают этот край бумаги на две стеклянные пластинки, 
расположен­ ные параллельно друг другу с зазором 1 см. Бумагу прижимают 
к нижним пла-стинкам двумя такими же верхними пластинками. 
20 

---

Рис. 1. Схема разметки и расположения хроматографической бумаги 
4. Капиллярными пипетками наносят в точки 1, 2, 3 стандартные 
аминокис­ лоты (например, лизин, аланин и фенилаланин соответственно), в 
точку 4 смесь этих аминокислот. 
Можно использовать следующие сочетания аминокислот (растворы 
концентрацией­ 0,1 М): 
а) лизин, аланин, фенилаланин; б)
глутаминовая кислота, аланин, лейцин; в)
цистеин, треонин, метионин. 
5. После подсыхания пятен помещают полоску бумаги в хроматографиче­ 
ский сосуд. На дно сосуда наливают смесь бутанола, уксусной кислоты и 
воды (4:1:1). Помещают хроматограмму так, чтобы «заостренный» конец был 
погру­ жен в растворитель. 
6. Сосуд плотно закрывают крышкой и оставляют на 2 часа. 
7. Через 2 часа хроматограмму вынимают из сосуда, отмечают границу 
фронта растворителя, делая небольшие надрезы ножницами слева и справа, и 
высушивают хроматограмму в вытяжном шкафу. 
Рис. 2. Установка для бумажной хроматографии 
21 

---

8. На высушенную хроматограмму наносят при помощи пульверизатора 
0,5 % раствор нингидрина в ацетоне так, чтобы хроматограмма была равно-
мерно смочена раствором, и оставляют на 5 минут в вытяжном шкафу. 
9. Помещают хроматограмму в сушильный шкаф при температуре 70 °С 
на 15 минут. 
10. Проводят идентификацию аминокислот по значению R
f
. Для этого 
измеряют­ с точностью до миллиметра расстояние, пройденное растворителем от 
линии­ старта до границы фронта растворителя. С такой же точностью из-меряют 
расстояние от точки нанесения каждой аминокислоты до центра цвет-ного пятна, 
образовавшегося в результате нингидриновой реакции. 
R
f
— величина постоянная для каждой аминокислоты при одинаковых 
условиях­ опыта: температура, сорт бумаги, растворитель. Сравнивают R
f
из-
вестных стандартных аминокислот с R
f
аминокислот исследуемой смеси. 
Указания к составлению отчета: приклеить полученную хроматограмму в 
тетрадь, привести все измерения и вычисления для каждой аминокислоты.