Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Реактивы и оборудование: 
Пекарские дрожжи; гидроксид натрия (0,4 % и 10 %); уксусная кисло-та 
(10 %); лакмусовая бумага; соляная кислота (конц.); сульфат меди (1 %); аммиак­ 
(конц.); нитрат серебра (1 %); диэтиловый эфир, серная кислота (10 %); 
орциновый реактив: 50 мл FeСl
3 
• 6H
2
O растворяют в 250 мл концен­ 
трированной соляной кислоты (ρ 1,14 г / мл). Этот раствор хранят в склянке 
темного цвета под тягой не более одного месяца. Перед опытом к нему до­ 
бавляют орцин, из расчета на 1 мл раствора 4,76 мг орцина; раствор флоро-
глюцина: 0,2 г флороглюцина растворяют в 100 мл 30 % соляной кислоты­; Фе-
лингова жидкость: готовят два раствора: А. — 34,6 г CuSО
4
•
5Н
2
О в 500 мл 
раствора. Б. — 17,3 г сегнетовой соли и 70 г NaOH в 500 мл раствора. Раство-ры 
хранят раздельно. Перед применением смешивают рав­ные объемы первого и 
второго раствора; молибдат аммония: смешивают 15 % раствор молиб-дата 
аммония с концентрированной азотной кисло­той в отношении 110:90; 
магнезиальная смесь: 100 г хлорида магния, 200 г хлорида аммония, 20 мл кон-
центрированного раствора аммиака растворяют­ в воде и доводят до 1 литра. 
Центрифуга, колбы круглодонные на 100 мл с обратным воздушным холодиль-
ником, ступки с пестиком, кварцевый песок­, стаканы с носиком на 200 мл, ци-
линдры мерные на 50 мл, воронки стеклянные­, палочки стеклянные, пробирки, 
песчаные бани, фильтровальная бумага. 
Ход работы: 
1. 
 
Гомогенизация. 10 г дрожжей смешивают в ступке со 
сме­
 
сью из 2 мл эфира и 2 мл воды, добавляют 5 г песка и тщательно 
растирают, приливая к растертой массе небольшими порциями 40–50 мл 0,4 % 
раствора гидроксида натрия. Растирание продолжают в течение 15–20 минут. 
2. Центрифугирование. После этого гомогенант помещают в центрифуж­ 
ные пробирки для центрифугирования. Центрифугат сливают в стакан и к 
нему прибавляют небольшими порциями (по 0,5 мл) 10 % уксусную кислоту 
до слабокислой­ реакции по лакмусу (5–6 мл). Полученный осадок 
нуклеопроте-идов отделяют центрифугированием. 
3. Гидролиз. Осадок из центрифужной пробирки помещают в колбу для 
ги-дролиза, приливают 20 мл 10 % раствора серной кислоты. Колбу закрывают 
пробкой с проходящим через нее воздушным холодильником (стеклянная 
трубка длиной 70 см и диаметром 0,7–0,8 см), смесь кипятят на песчаной бане 
в течение 1 часа, поддерживая слабое кипение. 
4. Анализ гидролизата. Гидролизат отфильтровывают и в прозрачном филь-
трате определяют белки, пентозы, пуриновые основания, фосфорную кислоту.