Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ 
Для количественного определения белков применяют физические, химиче­ 
ские и биологические методы. 
Из физических методов наибольшее распространение получили три: 
реф­
рактометрический 
—
 
по показателю преломления белковых растворов,
 спек­ 
трофотометрический 
—
 
по поглощению в ультрафиолетовой области спек-
тра, 
полярографический
— по кривым, показывающим зависимость между 
силой тока и напряжением, приложенным к системе, содержащей белок. 
Для экспрессивного установления содержания белка широко используется 
прямая спектрофотометрия образцов при определенных длинах волн. Наиболь-
шей известностью пользуется метод, основанный на измерении оптической 
плотности образца при 280 и 260 нм, предложенный Варбургом и Христианом. 
Однако этим методом можно лишь ориентировочно определить концентрацию 
белков, потому что они между собой могут сильно отличаться содержанием 
ароматических аминокислот­, обуславливающих экстинцию при 280 нм. 
Химические методы определения белков разнообразны. Наиболее простым 
химическим методом является количественное определение общего или белко­ 
вого азота. Умножая величину процентного содержания общего азота на коэф­ 
фициент 6,25 (среднее содержание азота в белках 16 %, отсюда 100 :16 = 6,25), 
получают­ данные о содержании сырого белка. Однако способ условен, так как не 
дает абсолютных результатов. Самым распространенным химическим методом 
количественного определения белка является 
фотоколориметрический метод
.
 
Он основан на измерении интенсивности цветных реакций,
 
развивающихся при 
взаимодействии белков с тем или иным специфическим реагентом. Для 
определения концентрации белка часто применяют метод Лоури. Однако, 
несмотря на высокую чувствительность, он имеет определенные недостатки, так 
как используемый в этом методе реактив Фолина — Чокольтеу дает сильную 
реакцию и на некоторые другие вещества. 
23 

---

Биологические методы применимы только к белкам, обладающим фермен­ 
тативной и гормональной активностью. Измеряя степень биологической 
актив-ности препарата, можно составить представление о содержании в нем 
белка. Этот метод не дает абсолютных результатов.