Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Ход работы: А.
 
В пробирку вносят
 
1 мл
 
1 %
 
раствора глицина и
 
5
 
капель
 
1 % 
раствора нингидрина в 95 % растворе ацетона. Содержимое пробирки тща-тельно 
перемешивают и помещают на пять минут в термостат при температуре 
70 °С. 
Б.
 
В пробирку приливают
 
3 мл
 
0,01 %
 
раствора пролина и
 
5
 
капель
 
1 %
 
рас-твора нингидрина в ацетоне. Содержимое пробирки перемешивают и 
нагрева-ют в термостате при температуре 70 °С в течение 5 минут. 
В.
К
 
1 мл
 
1 %
 
раствора белка добавляют
 
5
 
капель
 
0,5 %
 
водного раствора
 
нингидрина, перемешивают и помещают в термостат на 5 минут при темпера­ 
туре 70 °С. В пробирке появляется розово-фиолетовое окрашивание, с течени-
ем времени раствор синеет. 
Биуретовая реакция 
В щелочной среде раствор белка при взаимодействии с ионами меди 
приоб­ ретает сине-фиолетовое или красно-фиолетовое окрашивание. 
Биуретовую ре­ акцию способны давать вещества, которые содержат не менее 
двух пептидных связей, например три-, тетрапептид и т. д. 
Впервые реакция образования комплексных соединений меди была прове­ 
дена для биурета, отсюда и название реакции — биуретовая. Биурет образует-
ся при нагревании сухой мочевины: 
2NH
2
—СО—NH
2
180 °С
NH
2
—CO—NH—CO—NH
2
+ NH
3 
В щелочной среде биурет переходит в енольную форму: 
Две молекулы биурета взаимодействуют с гидроксидом меди с образовани 
ем биуретового комплекса: 
Биуретовая реакция обусловлена образованием 
биуретового
комплекса в 
результате соединения ионов меди с 
пептидной
связью белка. Окраска биуре-
тового комплекса зависит от количества ионов меди, от длины 
полипептидной цепи, концентрации белка и может варьировать от розового 
до сине-фиолетового цвета. 
12 

---

Гидроксид меди (II) для проведения биуретовой реакции получают 
взаимо-действием гидроксида натрия и сульфата меди: 
2NaOH + CuSO
4
= Na
2
SО
4
+ Cu(OH)
2
↓ 
В щелочной среде пептидные связи белка из 
кетоформы
переходят в 
еноль-ную 
форму,
 
которая взаимодействует с гидроксидом меди
 
(II): 
Аминокислоты не дают положительную биуретовую реакцию за исклю-
чением гистидина, серина, треонина при условии больших концентраций их в 
растворе: 
Биуретовый комплекс гистидина