Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Ход работы: 
В три пробирки
 
(для определения уровня общего 
билирубина,
 
связанного билирубина и постановки контрольной пробы на цвет 
сыворотки) вводят реактивы согласно схеме (табл. 18). 
При определении уровня общего билирубина пробу оставляют при 
комнатной температуре на 20 минут для развития окраски. В дальнейшем 
окраска пробы не изменяется. 
Для установления содержания конъюгированного (связанного) билируби-
на колориметрирование осуществляют спустя 5–10 минут после добавления 
диазосмеси, так как при длительном стоянии пробы в реакцию вступает сво-
бодный билирубин. 
Контроль на оптическую плотность раствора сыворотки ставят для 
каждой опытной пробы. 
Таблица 18. Данные для определения уровня билирубина в 
сыворотке крови 
Общий 
Конъюгированный 
Контрольная 
Реактив 
(связанный) 
билирубин (мл) 
проба (мл) 
билирубин (мл) 
Сыворотка 
0,25 
0,25 
0,25 
Кофеиновый реактив 
1,75 
— 
1,75 
Физиологический раствор 
— 
1,75 
0,25 
Диазосмесь 
0,25 
0,25 
— 
Примечание. 
Допускается уменьшение объемов реагентов в
 
2
 
раза при ис-
пользовании кювет объемом 1 мл с шириной слоя 10 мм. 
Колориметрируют пробы при зеленом светофильтре (500–560 нм). В слу-
чае использования фотометра применяют кювету с шириной слоя 5 мм. 
Оценку результатов производят по калибровочному графику, построенному в 
соответ-ствии с инструкцией к наборам реагентов «Билирубин-эталон» 
фирмы «Лахема» или другим аналогичным. При их отсутствии можно 
воспользоваться способом Шеллонга и Венде. Весьма хорошие результаты 
получены при использовании параллельно проводимого через все этапы 
метода калибратора фирмы «Хоффманн — Ла Рош» (с концентрацией 
билирубина 89,8 мкмоль / л или близкой к этой точно известной величине). 
Находят содержание общего и связанного билирубина в мкмоль / л. Для 
определения уровня несвязанного (свободного) билирубина из цифры общего 
его содержания вычитают показатель конъюгированного (связанного) 
билирубина. 
170 

---

В 
норме
концентрация общего билирубина в плазме (сыворотке) крови со-
ставляет 8,55–20,52 мкмоль / л. 75% его количества приходится на долю сво-
бодного билирубина. 
Средние величины содержания в плазме общего, конъюгированного (свя-
занного) и свободного билирубина составляют соответственно 11,12; 2,57 и 
8,56 мкмоль / л. 
Примечания: 
1. 
 
Некоторые авторы рекомендуют после развития окраски
 
(перед этапом фотометрирования) добавлять в пробы по 3 капли раствора 
NаОН концентрации 300 г / л: цвет раствора при этом изменяется на зеленый 
(при большой концентрации щелочи — на синий), часто наблюдается 
исчезно-вение мутности. Пробы с полученной окраской следует 
фотометрировать при красном светофильтре. 
2. В случае большой концентрации билирубина сыворотку нужно 
развести изотоническим раствором в два раза. 
3. Интенсивность окраски не меняется в течение 30 минут.