Учебная литература медицинских вузов для студентов

Тема 8.1. МИКРОФЛОРА ВОДЫ, ВОЗДУХА И ПОЧВЫ. МЕТОДЫ САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ВОДЫ, ВОЗДУХА И ПОЧВЫ
План
Программа
Микрофлора воды, воздуха и почвы.
Санитарно-показательные микроорганизмы и их зна­чение.
Методы определения коли-индекса, коли-титра и микробного числа воды.
Методы определения микробного числа воздуха.
Методы определения перфрингенс-титра, коли-титра и микробного числа почвы.
Демонстрация
Санитарно-бактериологическое исследование воды методом мембранных фильтров.
Санитарно-бактериологическое исследование воздуха.
Аппарат Кротова. Рост микроорганизмов на МПА в чашке Петри. Рост гемолитических стрептококков на кровяном агаре.
Санитарно-бактериологическое исследование почвы.
Рост Proteus vulgaris (по Шукевичу).
Задание студентам
Провести оценку санитарно-бактериологического со­ стояния воды по результатам определения микробного числа, коли-индекса и коли-титра.
Провести оценку санитарно-бактериологического со­ стояния воздуха по результатам определения микроб­ного числа.
Провести оценку санитарно-бактериологического состояния почвы по результатам определения микробного числа, коли-титра, перфрингенс-титра и титра термофильных бактерий.

Объект Характер загрязнения Санитарно-показательные бактерии Вода Фекальное Бактерии группы кишечных па­лочек Escherichia coli, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes, Enterococ-cus faecalis Почва То же Те же бактерии и клостридии ( Clostridium perfringens, С/, sporo-genes и др.) Промышленно-быто- Термофильные бактерии, Proteus вые (разлагающиеся vulgaris отбросы) Пищевые Фекальное Бактерии группы кишечных па-продукты лочек S. faecalis, P. vulgaris Орально-капельное Staphylococcus aureus Предметы Фекальное Бактерии группы кишечных па-обихода лочек, P. vulgaris, E. faecalis Орально-капельное S. aureus Воздух То же S. aureus, S. pyogenes Вода, Промышленное Производственные штаммы мик-почва, робов воздух

О микробной обсемененности судят по микробному числу — общему количеству микробов, содержащихся в единице объема или массы исследуемого объекта (1 мл воды, 1 г почвы, 1 м³ воздуха). Содержание санитарно-показательных бактерий оце­нивают по двум показателям — титру и индексу. За титр при­нимают тот минимальный объем или массу исследуемого ма­териала, в которых обнаруживают санитарно-показательные бактерии; индекс показывает количество санитарно-показа­тельных бактерий, содержащихся в 1 л жидкости, 1 г плотных веществ, 1 м³ воздуха. К санитарно-показательным бактериям относятся представители облигатной микрофлоры организма человека и теплокровных животных, для которых средой оби­тания являются кишечник или респираторный тракт. Они об­ладают следующими свойствами: 1) постоянно выделяются в большом количестве из организма во внешнюю среду; 2) не имеют других мест обитания; 3) способны сохраняться в окру­жающей среде в течение тех же сроков, что и патогенные бактерии, паразитирующие в кишечнике или респираторном тракте; 4) не способны интенсивно размножаться на каких-либо объектах вне организма хозяина и изменять свои свойст­ва. Перечисленные признаки присущи ряду бактерий, которые признаны санитарно-показательными для различных объектов окружающей среды (см. табл. 8.1.1).

Санитарно-показательными микробами, свидетельствующи­ми о фекальном загрязнении окружающей среды, являются бак­терии группы кишечной палочки (БГКП). Они принадлежат к разным родам семейства Enterobacteriaceae. Дифференциально-диагностические признаки БГКП представлены в табл. 8.1.2. Обнаружение E.coli в каких-либо объектах окружающей среды или пищевых продуктах считается наиболее достоверным по­казателем свежего фекального загрязнения. Наличие бактерий родов Citrobacter и Enterobacter указывает на относительно дав­нее фекальное загрязнение. Присутствие Clostridium perfrin-gens, С. sporogens и других клостридий в почве свидетельствует о ее фекальном загрязнении, причем как свежем, так и давнем, поскольку эти бактерии образуют споры, что позволяет им длительно сохраняться в окружающей среде (в частности, в почве). Обнаружение в объектах окружающей среды Enterococ-cusfaecalis также свидетельствует об их фекальном загрязнении. К группе термофильных бактерий относятся неродственные бактерии, представители различных семейств, способных раз­множаться при температуре 60 °С и выше (Lactobacillus lactis, Streptococcus thermophilus и др.). Они не являются постоянными обитателями кишечника человека и не служат критериями фекального загрязнения окружающей среды. Резкое увеличе­ние количества этих бактерий может свидетельствовать о за­грязнении почвы разлагающимися отбросами, поскольку они размножаются в саморазогревающемся навозе и компостах.

Вид бактерий Признак продук- метило- реак- индоло- рост на рост в ты сбра- вый ция Фо- образо- цитрат- присут-живания красный геса— вание ной ствии Проска- среде KCN уэра Escherichia Смесь + — + — — coli кислот Citrobacter То же + — р + + freundii Enterobacter Бутан- — + — + + aerogenes диол

тельно перемешивают с водой. Посевы инкубируют при 37 "С в течение 1—2 сут. Воду из открытых водоемов засевают па­раллельно на две серии чашек, одну из которых инкубируют при 37 °С в течение 1 сут, а другую — 2 сут при 20 "С. Затем подсчитывают количество выросших на поверхности и в глу­бине среды колоний и вычисляют микробное число воды — количество микроорганизмов в 1 мл.
Определение коли-титра и коли-индекса воды. Коли-mump воды — минимальное количество воды (мл), в котором обна­руживаются БГКП. Коли-индекс — количество БГКП в 1 л во­ды. Эти показатели определяют титрационным (бродильным) методом или методом мембранных фильтров.
Метод титрования. Производят посев различных объ­емов воды в глюкозопептонную среду (1 % пептонная вода, 0,5 % раствор глюкозы, 0,5 % раствор хлорида натрия, инди­катор Андреде и поплавок), причем для посевов больших ко­личеств (100 и 10 мл) используют концентрированную среду, содержащую 10-кратные количества указанных веществ.
Воду открытых поверхностных водоемов исследуют в объ­емах 100; 10; 1,0 и 0,1 мл. Для исследования водопроводной воды делают посевы трех объемов по 100 мл, трех объемов по 10 мл и трех объемов по 1 мл. Посевы инкубируют в течение 1 сут при 37 "С. О брожении судят по наличию пузырьков газа в поплавке. Из забродивших или помутневших проб произво­дят посевы на среду Эндо. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по методу Грама и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia., Citrobacter и Enterobacter от грамотрицательных бактерий семей­ства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бак­терий, обитающих в воде. С этой целью стеклянной палочкой снимают 2—3 изолированные колонии с поверхности среды, наносят штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную ди-метил-п-фенилендиамином. При отрицательном оксидазном тесте цвет бумаги не изменяется, при положительном она окрашивается в синий цвет в течение 1 мин. Грамотрицатель-ные палочки, не образующие оксидазу, вновь исследуют в бродильном тесте — вносят в полужидкий питательный агар с 0,5 % раствором глюкозы и инкубируют при 37 "С в течение 1 сут. При положительном результате определяют коли-титр и коли-индекс по статистической табл. 8.1.3.
Метод мембранных фильтров. Мембранный фильтр № 3 помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуумному насосу. Мем­бранные фильтры предварительно стерилизуют кипячением в дистиллированной воде. Воду из водопроводной сети и воду артезианских скважин фильтруют в объеме 333 мл. Чистую воду открытого водоема фильтруют в объеме 100, 10, 1,0 и 0,1 мл, более загрязненную перед фильтрованием разводят стерильной

Количество положительных Коли Пределы индекса Коли -титр результатов индекс из 3 объ- из 3 объ- из 3 объ- нижний верхний емов по емов по емов по 100 мл 10 мл 1 мл 000 Менее 3 — — Более 3300 001 3 0,5 9 333 010 3 0,5 13 333 1 00 4 0,5 20 250 101 7 1 21 143 3 3 2 1100 150 4800 0,9 333 Более! 100 - — Менее 0,9

Показатель Норматив Число микробов в 1 мл воды, не более 100 Число бактерий группы кишечных палочек в 1 л воды 3 (коли-индекс), не более

миксиновая и др.), инкубируют при 37 °С в течение 2 сут, через I 24 и 48 ч производят высевы на плотные элективно-дифферен­циальные среды: агар КФ, агар ТТХ (среда с трифенилтетра-золий-хлоридом), полимиксинтеллуритный агар. Идентифици­руют стрептококки по виду колоний, морфологии клеток и окраске по методу Грама. На среде с ТТХ стрептококки обра­зуют колонии темно-красного цвета, на агаре с теллуритом — черного цвета.
Состав сред. Среда КФ: 2 % питательного агара, 1 % дрожжевого экстракта, 2 % лактозы, 0,4 % азида натрия, 0,06 % карбоната натрия, индикатор бромкрезоловый красный.
Полимиксиновая среда: 2 % питательного агара, 1 % дрожжевого экстракта, 1 % глюкозы, полимиксин М 200 ЕД/мл, индикатор бромтимоловый синий.
Полимиксинтеллуритный агар: 2 % питательного агара, 1 % дрожжевого экстракта, 1 % глюкозы, кристалличес­кий фиолетовый 1:800 000, полимиксин М 200 ЕД/мл, 0,01 % теллурита калия.
Агар трифенилтетразолий-хлорид (ТТХ): 2 % пита­тельного агара, 1 % дрожжевого экстракта, 1 % глюкозы, кристаллический фиолетовый 1:800 000, 0,01 % ТТХ.
При определении индекса E.faecalis пользуются статистичес­кими таблицами, применяемыми при установлении коли-ин-декса. Кроме того, с этой целью используют метод мембранных фильтров. Для обнаружения патогенных бактерий воду пропус­кают через мембранные фильтры, которые затем помещают в жидкие элективные среды или на поверхность плотных диф­ференциально-диагностических сред.
• Санитарно-бактериологическое исследование воздуха
Определение микробного числа воздуха. Количественные ми­кробиологические методы исследования воздуха основаны на принципах осаждения (седиментации), аспирации или фильт­рации.
Седиментационный метод. Две чашки Петри с пита­тельным агаром оставляют открытыми в течение 60 мин, после чего посевы инкубируют в термостате при 37 "С. Результаты оценивают по суммарному числу колоний, выросших на обеих чашках: при наличии менее 250 колоний воздух считается чис­тым; 250—500 колоний свидетельствует о загрязнении средней степени, при количестве колоний более 500 — загрязненным.
Аспирационный метод. Это более точный количест­венный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляют с помощью приборов. Аппарат Кротова (рис. 8.1.1) устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью засасывается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром.

Место отбора проб Микробное число S.aureus (в 250 л) Операционные до начала работы Не более 500 Не допускается во время работы » » 1000 То же Родильные комнаты » » 1000 » » Палаты для недоношенных детей » » 750 » »
Характеристика почвы Коли-титр Перфрингенс- Количество титр термофильных бактерий в 1 г почвы Чистая 1,0 и выше 0,01 и выше 10^2— 10^3Загрязненная 0,9—0,01 0,009—0,0001 От 1 0^3 до 1 0^5Сильно загрязнен- 0,009 и ниже 0,00009 и ниже От 10^5 до 4хЮ^6нал