|
разделения смесей любой сложности. Процесс разделения в тонкослойной хроматографии
зависит от состава подвижной и неподвижной фазы. Причем наиболее сильным влиянием
может обладать состав подвижной фазы. Это обусловлено широким выбором
растворителей и распределением их по силе и селективности. При этом варьируется
взаимодействие в системе сорбент - сорбат - растворитель и изменяются условия
хроматографического разделения веществ. [4]. Полярность подвижной фазы является
ключевым свойством, позволяющим управлять хроматографическими и другими
сепарационными процессами [4, 5].
220
Однако этот метод обладает относительно низкой чувствительностью и
селективностью, а его информативность очень низка и не позволяет делать выводы о
составе пробы на основании данных, полученных методом ТСХ.
Следствие чего встает необходимость разработки более чувствительной и
селективной методики определения данного класса соединений.
В данном случае масс-спектрометрия МАЛДИ является подходящим способом
структурного
и
количественного
анализа,
поскольку
обладает
высокой
чувствительностью и возможностью перевода аналита в ионизированное состояние
непосредственно с пластины для ТСХ.[6]
Масс-спектрометрия (МС), как мощный метод качественного и количественного
анализа, появился более ста лет назад. Первый масс-спектрометр (масс-спектрограф) был
сконструирован в 1912 году Дж. Томсоном, и с тех пор метод используется при анализе
неорганических, органических, элементорганических и биоорганических молекул, а
последние 30-40 лет и биологических макромолекул практически без ограничения по
массам[7]. Масс-спектрометрический анализ биологических молекул получил широкое
развитие после создания методов мягкой ионизации, таких как ионизация
электрораспылением (ИЭР) и матрично-активированная лазерная десорбция/ионизация
(МАЛДИ) [8,9] . Последний метод был изобретен Ф. Хилленкампом, М. Карасом [10] и К.
Танакой [11].
Эффективность масс-спектрометрии определяется не только методом ионизации,
но и типом масс-анализаторов, обеспечивающих разделение ионов. Часто используются
квадрупольные (Q) и время-пролетные (TOF) масс-анализаторы, комбинацию которых
(QToF) применяют в приборах для тандемной масс-спектрометрии, позволяющей
регистрировать масс-спектры нескольких порядков.[12,13] Масс-анализаторы на основе
орбитальной ловушки (Орбитреп) и ионного циклотронного резонанса с преобразованием
Фурье обеспечивают сверх- и ультравысокое разрешение масс-спектрометров.
В основе метода МАЛДИ лежит способность ряда органических соединений
возгоняться при пониженном давлении при поглощении электромагнитного излучения
видимого или ультрафиолетового диапазона высокой интенсивности. Такие вещества
выполняют функцию матрицы. Источником же электромагнитного излучения является
лазер, что отражено в названии метода. [14]
Метод MALDI обладает следующими основными преимуществами [15]:
позволяет определять как простые, так и сложнейшие биологические молекулы
(молекулярные ионы которых имеют массы от нескольких Дальтон до 2000000 Дальтон)
221
низкая фрагментация анализируемых соединений и высокая интенсивность
пиков молекулярных ионов; возможность анализа наиболее термолабильных,
труднолетучих веществ.
Применение
комбинации
матрично-активированной
лазерной
десорбции/ионизации с тонкослойной хроматографией для исследования органических
соединений является перспективным направлением в фармацевтическом анализе
лекарственных средств.
Работы по прямому сочетанию ТСХ и МАЛДИ продолжаются уже около 30 лет с
целью получить детальные так называемые «ТСХ изображения» без потери разрешения и
чувствительности масс-спектрометра [16].
Среди способов прямого сочетания ТСХ-МАЛДИ особенно выделяются следующие:
3)
Соскоб пятна аналита с пластины ТСХ с последующим экстрагированием
растворителем. Затем этот экстракт можно проанализировать классическим методом
МАЛДИ-МС. Этот способ удобен и обеспечивает необходимую информацию, однако
является довольно утомительным и занимает много времени. Кроме того, соединения с
очень близким значением R
f
не могут быть дифференцированы после выскабливание из
пластины для ТСХ.
4)
Масс-спектрометрический анализ целой пластинки для ТСХ, позволяющий
проводить двумерное сканирование пластин.
К масс-спектрометрическому анализу пластин ТСХ методом МАЛДИ
предъявляются следующие требования: (I) необходимо использование УФ поглощающей
матрицы, которая должна быть нанесена на пластину ТСХ; (II) излучение УФ-лазера не
должно глубоко проникать в сорбционный слой пластины ТСХ, а аналит должен
концентрироваться на поверхности сорбента. Оба условия должны быть выполнены без
серьезного размывания пятна аналита во время добавления раствора матрицы, т. е. без
ущерба для достигнутого качества хроматографического разделения [17].
Есть в основном пять различных способов нанесения матричных растворов на
пластину ТСХ для последующего анализа на масс-спектрометре МАЛДИ [18]:
1)
Добавление с помощью пипетки капли раствора матрицы на (ранее отмеченное)
пятно аналита на пластине ТСХ.
2)
Использование растворителя или смеси растворителей с относительно высоким
поверхностным натяжением.
3)
Опрыскивание пластинки ТСХ раствором матрицы (например, с помощью
электрораспылителя).
222
4)
Нанесение кистью «перенасыщенного» раствора матрицы на пластину для ТСХ
[19]
5)
«Нажатием» пластины ТСХ на поверхность, на которую нанесена кристаллическая
матрица.
Для того, чтобы преодолеть проблемы с неровностью пластины ТСХ была
предложена методика [20] использования «гибридной пластины». В этом случае после
Do'stlaringiz bilan baham: |
