Производство иммунобиологических лекарственных препаратов Производство противобактериальных вакцин и бактериальных антигенов-диагностикумов

Авторы гибридомной технологии-лауреаты Нобелевской премии 1976 г.

Цезарь Мильштейн Георг Кохлер

Моноклональные антитела

• Антитела, возникающие в ходе иммунного ответа на конкретный антиген в норме поликлональны, так как они синтезируются одновременно многими клонами плазматических клеток. Как результат, поликлональные АТ не являются однородными из-за отличий в строении их вариабельных участков (активных центров). При проведении искусственной иммунизации таким образом получают поликлональные иммунные сыворотки и препараты иммуноглобулинов.
• Антитела, продуцируемые единственным клоном плазмоцитов, включая их опухолевый вариант (миеломные клетки) называются моноклональными. Такие АТ имеют идентичную аминокислотную последовательность, включая строение их активных центров. Вследствие этого они проявляют одинаковую аффинность и авидность (силу связывания) при взаимодействии с антигеном. Данные АТ моноспецифичны, направлены к одному эпитопу АГ.

Антителопродуцирующие плазматические клетки
Антиген
Слияние клеток обоих типов
Клетки плазмацитомы
Получение очищенных моноклональных антител
Замораживание гибридом для сохранения
Размножение гибридом в мышах и производство антител
Размножение гибридом
Выделение нужных гибридомных клеток
Рост разных гибридомных клеток
Получение гибридом-
продуцентов моноклональных антител

Смесь гибридных клеток разбавляют до их минимального содержания – одна гибридомная клетка на одну лунку с культуральной средой. Тем самым получают гибридомные клоны, которые далее размножают (клонируют).

Cхема получения моноклональных антител

• Смесь гибридных клеток разбавляют до их минимального содержания – одна гибридомная клетка на одну лунку с культуральной средой. Тем самым получают гибридомные клоны, которые далее размножают (клонируют).
• Гибридомные культуры тестируют на продукцию специфических АТ. После их обнаружения соответствующий клон отбирают и накапливают. В результате он продуцирует моноклональные АТ, специфичные к единственному эпитопу изучаемого антигена.
• Биомасса полученных гибридомных клеток секретирует большие количества мАТ с идентичной специфичностью и сродством к АГ. Их очищают из культуральной среды и стандартизируют.
• Гибридомы можно хранить в замороженном состоянии и в любое время вводить дозу такого клона в животное той линии, от которой получены клетки для слияния.