Приципитация усули ёрдамида антиген-антитана титрини аниқлаш. Ишнинг мақсади

Ускуналар ва материаллар. Приципитация усули учун жиҳоз.


Лабаратория ишини бажариш тартиби.
Антиген ва антитананинг ўзаро таъсирини аниқлаш учун икки гуруҳ усуллардан фойдаланилади:
I гурух . Антиген ва антитананинг ўзаро таъсирини баҳолаш усулларининг биринчи гуруҳи иккиламчи ҳодисаларни рўйхатга олишга асосланган:
- иммун хосилаларининг чўктирилиши;
- антигенни ташувчи заррачаларнинг аглютинацияси (ёпишқоқлиги) (қизил қон таначалари, антигенга хос заррачалар ва бошқалар.);
- комплиментнинг актив қисми билан боғланиши ва эритроцитларнинг парчаланишининг келиб чикиши ва бошқалар.
II гурух . Иккинчи гуруҳ усуллари Антиген ва антитананинг мажбурий тўғридан-тўғри рўйхатланишига асосланган. Бунинг учун компонентлардан бири (одатда антителолар) этикетланади ва сўнгра этикетланган реагентнинг реакциясининг бошқа компонентига боғланиши аниқланади. Белги учун радиоактив изотоплар (радионуклидлар), ферментлар ва флорохромлар деб аталадиган бўёқлар ишлатилади. Усуллари мос равишда радиоиммунли,иммуноферментли ва иммунофлюоресцентли ва деб аталади.
Серологик реакцияларнинг турлари:
- агглютинациия реакцияси
- преципитация реакцияси
- нейтралланиш реакцияси
- комплементар боғланиш реакцияси
- иммунофлюоресценциия реакцияси
- радиоиммунологигик таҳлил
- (иммунофермент усули (ИФА)
Аглютинация реакцияси (РА) (agglutinacio – боғланиш) – антиген ва антитананинг бир бири билан тасурлашувида 2 валентли антигеннинг электролитлар иштирок этувчи рекцияси хисобланади. Бу ҳолда антиген корпускуляр ҳолатда (қизил қон таначалари, бактериялар, адсорбцияланган антигенлар кўринишида) иштирок этади. Аглютинация содир бўлганда корпускуляр антигенлар антителалар билан бир-бирига бирикканда чўкма ҳосил бўлиши билан намоён бўлади.
Оддий (бевосита) аглютинацияда эса антителолар заррачаларнинг антигенли детерминантлари билан реакцияга киришади.
Тўғридан-тўғри гемагглютинация реакцияси антитаналарнинг ташқи антигенлари билан таъсирлашиб қизил қон ҳужайраларига қайта боғланиш қобилиятига асосланган.
Пассив ёки билвосита гемагглютинация (РПГА или РНГА) икки вариантда содир бўлади: антитаналарни аниқлаш учун маълум антиген ёки антигенни аниқлаш учун маълум антитаналар билан боғланиши шарт. РНГА ни қўйиш учун қизил қон ҳужайра диагностикумлари ишлатилади бу эса антигенлар ёки қизил қон ҳужайраларига антитаналарни адсорбция қилиш орқали тайёрланади.
Преципитация реакцияси. Преципитация асосани камида иккита фаол марказга эга бўлган антителалар билан антигенларнинг ўзаро таъсири натижасида содир бўлади. Преципитация-бу антиген ва ўзига хос антителоларнинг эрувчан комплексларини ҳосил қилишда чўкмага тушиши кузатилади. Чўкманинг максимал миқдорини шакллантириш антиген ва антителаларнинг эквивалент нисбатларида кузатилади улардан бирининг ортиқча миқдори иммун комплекслари сонини камайтиради.
Преципитация реакцияси вақтида содир бўладиган жараёнлар "панжара" назарияси (Marrack) билан тушунтирилади. Шундай қилиб, антиген оз сонли антитаналар билан ўзаро таъсирлашганда эрувчан комплекслар битта жуфт молекулалардан ҳосил бўлади. Антитаналар сони ортиб борар экан, ҳар бир антитана молекуласи иккита антиген молекулаларини боғлашдан ташқари балки анигенлар ўртасидаги боғланишни хам содир қилиши эса панжарани хасил қилади.Натижада молекула панжарасини хосил қиладики у чўкмага тушишига олиб келади.
Чўкма зичлиги антиген ва антитананинг концентрациялари нисбатига боғлиқ бўлиб, Гайдельбергера преципитация эгри чизиғи билан акс эттирилади. (10 -расм).